Mouse Orthotopic Liver Transplantation에서 Cuff Technique을 사용한 혈관 재건

요약

이 프로토콜은 마우스 orthotopic 간 이식에서 커프 기술을 사용하여 혈관 재건을 위한 기술 정보를 제공합니다.

초록

마우스 orthotopic 간 이식은 간 허혈 및 재관류 손상의 근본적인 메커니즘을 조사하기 위한 효과적인 방법론입니다. 그러나 기술적 과제는 이 귀중한 실험 모델을 활용하고 이러한 기술을 다음 세대에 전달하는 데 장벽이 됩니다. 이 절차에서 가장 어려운 측면은 문맥(PV), 하대정맥(IHIVC) 및 상하정맥을 포함한 혈관 재건입니다. 봉합사 대신 플라스틱 커프를 사용하면 PV 및 IHIVC 재구성을 보다 원활하게 할 수 있습니다. 혈관은 정맥 카테터로 만든 커프를 이식 혈관의 끝에 부착하고 커프를 수용 혈관에 삽입하여 재건합니다. 가장 중요한 두 가지 측면은 혈관의 내부 내강을 적절하게 시각화하고 과도한 힘을 가하지 않는 것입니다. 우리의 목표는 수혜자 수술에서 커프 기술을 사용하여 혈관 재건에 대한 기술적 개요를 제공하는 것입니다. 커프 기술에 대한 이러한 기술 팁은 미세 외과 의사가 혈관 재건을 촉진하고 연구를 발전시키는 데 도움이 될 것으로 기대됩니다.

서문

생쥐 기형간 이식(MOLT)은 1991년에 처음 보고된 효과적인 실험 방법입니다¹. 유전자 변형 마우스와 다양한 연구 시약을 활용한 이 실험 모델은 온열 및 냉간 허혈 및 재관류 손상을 조사하는 데 중추적인 역할을 했습니다. 그러나 이 모델의 높은 기술적 복잡성은 간 이식을 위한 기초 의학의 개발을 저해하고 있다². MOLT는 (1) 기증 마우스에서 간을 채취하고, (2) 백테이블 수술, (3) 수혜자에게 간을 이식하는 세 가지 주요 단계를 포함합니다. 이러한 수혜자 시술 중 혈관 문합술이 가장 큰 도전입니다. 상하정맥 문합술은 일반적으로 수작업^{스티칭 2}으로 완료되지만, IHIVC(infrahepatic inferior vena cava) 및 문맥(PV)은 손으로 꿰매는 봉합사 대신 플라스틱 커프를 사용하여 보다 효율적으로 재건할 수 있습니다.

무간주기는 수혜자의 본래 간이 제거된 시점과 이식편 이식 사이의 간격을 의미합니다. 일관된 결과를 보장하려면 무간 시간을 20분 미만으로 제한하는 것이 필수적입니다. 결과적으로, 이 모델을 채택한 연구는 특정 기관에 국한되어 있었다<....

프로토콜

실험 프로토콜은 교토 대학의 동물 실험 위원회의 승인을 받았습니다. 이 연구는 10주 이상 숙성되고 무게가 25g에서 30g 사이인 C57BL/6 마우스를 사용했으며, 상업용 출처에서 얻었습니다( 재료 표 참조). 모든 동물은 2.5% 이소플루란(기관에서 승인된 프로토콜에 따름)으로 마취하고, 특정 병원체가 없는 조건에서 유지하고, 모든 실험 절차는 교토 대학의 동물 실험에 관한 규정에 따라 수행되었습니다. 연구에 사용되는 적절한 도구는 재료 표 에 나열되어 있으며 그림 1 및 그림 2에 나와 있습니다.

1. 동물 선택

1. 체중이 25-30g인 마우스를 사용하십시오.
   참고: mouse liver allografts² 는 일반적으로 주요 조직적합성 복합체 장벽에서 받아들여지지만, 본 연구에서는 냉간허혈 재관류 손상의 상세한 메커니즘에 초점을 맞추기 위해 syngeneic MOLT 모델을 선택했다¹⁰. 무게가 25g 미만인 마우스는 얇은 담관에 내....

토론

혈관 재건술을 배우는 것은 성공적인 MOLT를 달성하는 데 가장 어려운 측면입니다. 커프의 품질은 마우스의 크기가 작다는 점을 감안할 때 재건의 어려움에 큰 영향을 미친다⁵. 이 문서에서는 커프 준비, 부착 및 재건에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다.

커프 준비 및 연결 ^2,5에 관한 이전 보고서와 큰 차이점은 ?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
16 G intravenous catheter	TERUMO	SR-FF2032	IHIVC cuff
20 G intravenous catheter	TERUMO	SR-FF1651	PV cuff
8-0 braid silk	Natsume Seisakusho	CR9-80B2	8-0 silk
Belzer UW Cold Storage Solution	Astellas		Organ preservation fluid
Bulldog clamp	B BRAUN	FB329R	Bulldog clamp
C57BL/6 mice	Oriental Bio Service
Isoflurane inhalation solution	Viatris		Anesthesic
Micro Blunted Tips 0.1 mm x 0.06 mm	F.S.T	11253-20	Straight microforceps
Micro Serrefine Clamp Applicator with Lock	F.S.T	18056-14	Vessel clip applicator
Micro Serrefines	F.S.T	18055-4	Vessel clip
No.11 Spare Blades	FEATHER Safety Razor	11	Blades
Ophthalmic scissor, round handle	B BRAUN	FD103R	Microscissor
Plastic rectangular-shaped container	Daiso		10 cm long, 15 cm wide and 6 cm high
SuperGrip Tips	F.S.T	00649-11	Curved microforceps
SZX7	Olympus	SZX7	Microscope