Gynura bicolor DC의 화학 성분을 연구하기 위한 고분해능 탠덤 질량 분석법

요약

우리는 고분해능 질량 분석 및 분자 도킹을 중국 전통 의학 연구에서 통합하는 일반 프로토콜에 대해 설명합니다.

초록

원하는 화학 성분의 분리 및 분석은 중국 전통 의학(TCM)의 기초 연구에서 중요한 주제입니다. 초고성능 액체 크로마토그래피 사중극자 비행 시간 탠덤 질량 분석법(UPLC-Q-TOF-MS/MS)은 점차 TCM 성분 식별을 위한 선도적인 기술이 되었습니다. Gynura 바이 컬러 DC. (BFH)는 중국에서 의약품 및 식품에 사용되는 다년생 줄기 없는 허브로 열을 맑게 하고 폐를 촉촉하게 하며 기침을 완화하고 정체를 분산시키며 붓기를 완화하는 등의 의약 효과가 있습니다. 폴리페놀과 플라보노이드에는 수많은 이성질체가 포함되어 있어 BFH의 복잡한 화합물을 식별하는 데 방해가 됩니다. 이 논문은 UPLC-Q-TOF-MS를 통한 용매 추출 및 통합 데이터를 기반으로 BFH의 화학 성분을 연구하기 위한 체계적인 프로토콜을 제시합니다.

여기에 설명된 분석법에는 시료 전처리, MS 보정, MS 수집, 데이터 처리 및 결과 분석을 위한 체계적인 프로토콜이 포함되어 있습니다. 시료 전처리에는 수집, 세척, 건조, 분쇄 및 추출이 포함됩니다. MS 교정은 다지점 및 단일 지점 보정으로 구성됩니다. 데이터 처리에는 데이터 가져오기, 분석법 설정, 분석 처리 및 결과 제시가 포함됩니다. Gynura bicolor DC. (BFH)에서 페놀산, 에스테르 및 배당체의 전형적인 단편화 패턴의 대표적인 결과가 이 논문에 제시되어 있습니다. 또한 유기 용매 선택, 추출, 데이터 통합, 충돌 에너지 선택 및 방법 개선에 대해 자세히 설명합니다. 이 범용 프로토콜은 TCM에서 복잡한 화합물을 식별하는 데 널리 사용될 수 있습니다.

서문

중국 전통 의학(TCM)은 수천 년 동안 중국에서 임상적으로 시행되어 왔으며 중국인의 건강을 유지하는 데 중요한 역할을 합니다¹. 한의학의 구성은 다양하고 복잡하며, 한의학은 화학적 조성에 초점을 맞춘 많은 질적 연구에서 널리 보고되고 있다². 한의학에서 사용되는 화학성분은 크게 알칼로이드, 유기산, 페닐프로파노이드, 쿠마린, 리그난, 퀴논, 플라보노이드, 테르페노이드, 트리테르페노이드 사포닌, 스테로이드 사포닌, 심장배당체, 탄닌 등으로 나눌 수 있다³. TCM에는 알려지지 않은 성분이 많고 구별할 수 없는 이성질체가 많기 때문에 원하는 화학 성분의 분리 및 분석은 TCM⁴의 기초 연구에서 중요한 주제입니다.

초고성능 액체 크로마토그래피 사중극자 비행 시간 질량 분석법(UPLC-Q-TOF-MS)은 초고성능 액체 크로마토그래피 ^5,6으로 분리할 수 있는 중국 전통 의학(TCM)의 물질을 분석하는 데 적용되었습니....

프로토콜

1. 시료 전처리

1. 눈에 띄는 침전물과 불순물이 없을 때까지 BFH 허브 전체를 순수한 물로 씻으십시오. 깨끗한 BFH를 접시에 담은 다음 오븐에 넣습니다(그림 1B). 오븐을 50°C로 24시간 동안 설정합니다.
   참고: BFH의 전체 공장은 중국 쓰촨성에서 수집되었습니다.
2. 고속 다기능 분쇄기에서 건조 BFH를 분쇄합니다. 굵은 분말을 50메쉬 체에 옮깁니다(그림 1C). 밀폐 된 봉투에 미세한 분말을 모아 건조탑에 보관하십시오.
3. 각각 0.25g의 BFH 샘플 6개를 정확하게 칭량하고 6개의 원뿔형 플라스크에 넣습니다. 각 원뿔형 병에 30mL의 유기 용매(50% 에탄올-물, 70% 에탄올-물, 클로로포름, 석유 에테르, 에틸 아세테이트 및 n-부틸 알코올)를 추가합니다(그림 1D).
4. 혼합물을 25 ° C에서 30 분 동안 추출하기 위해 초음파 수조 초음파 발생기로 옮깁니다. 샘플을 14,000 x g 에서 5분 동안 원심분리합니다. 주입 주사기와 0.....

결과

BFH의 화학적 조성 식별을 대표 결과를 표시하기 위한 모델로 사용하였다. 용매 추출된 Gynura bicolor DC의 기본 피크 크로마토그램. 는 보충 파일 1-보충 그림 S1-S6에 나타내며, 관찰된 머무름 시간(RT), 성분명, 공식, 질량 대 전하 비율(m/z) 및 질량 오차는 표 S1-S6에 나열되어 있습니다. ZBTK에서는 UPLC-TOF-MS의 분리된 피크에서 35가지 종류의 화합물을 모두 식별.......

토론

물 달인¹² 외에도, 유기 용매 추출은 TCM 전처리¹³의 또 다른 일반적인 방법이다. 유사 상 용해의 원리에 따라, 다양한 유기 용매(¹⁴)의 조합에 의해 수많은 성분이 추출되었다. 초음파 보조 추출은 TCM¹⁵에서 구성 요소를 얻는 데 사용되는 주요 방법 중 하나입니다. 초임계 이산화탄소 추출은 리그난

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
chloroform	Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd	CAS 67-66-3
ethanol	ChuandongChemical	CAS 64-17-5
ethyl acetate	ChuandongChemical	CAS 141-78-6
liquid chromatograph	Waters	ACQUITY Class 1 plus
MassLynx	Waters	V4.2	MS control software
n-butyl alcohol	ChuandongChemical	CAS 71-36-3
petroleum ether	ChuandongChemical	CAS 8032-32-4
Quadrupole time-of-flight mass spectrometry	Waters	SYNAPT XS
UNIFI	Waters		Data analysis software