덱스트란 설페이트 나트륨을 사용한 직장결장절제술 및 회장낭-항문 문합술 후 낭염의 쥐 모델

요약

이 프로토콜은 낭염의 쥐 모델을 확립하는 방법을 설명합니다. 회장낭 모델은 미세수술 기법을 사용하여 회장낭-항문 문합(IPAA) 수술을 수행하여 만들어졌습니다. 수술 후, 쥐는 4 일 동안 4 % 덱스트란 설페이트 나트륨 (DSS)으로 치료되었습니다.

초록

궤양성 대장염(UC)은 만성 면역 매개 질환으로 결장과 직장 전체에 재발 및 완화 과정에 영향을 미쳐 평생 질병을 유발합니다. 의학적 치료가 효과적이지 않을 때, 특히 대규모 위장관 출혈, 천공, 독성 거대결장 또는 발암의 경우 수술이 UC를 치료하기 위한 마지막 방어선이 됩니다. 결장 직장 전절제술과 회장낭-항문 문합술(IPAA)은 장기 치료를 위한 가장 좋은 기회를 제공합니다. 낭염은 가장 흔하고 골칫거리인 수술 후 합병증입니다. 이 연구에서는 IPAA 수술을 통해 실험용 쥐에서 회장 주머니 모델을 만들기 위해 미세 수술을 사용합니다. 그 후, 덱스트란 설페이트 나트륨(dextran sulfate súdcal, DSS)으로 회장낭의 염증을 유도하여 낭염의 지속적인 쥐 모델을 확립합니다. 쥐낭염의 성공적인 확립은 수술 후 전반적인 상태, 체중, 음식 및 수분 섭취량, 분변 데이터, 주머니 조직 병리학, 면역조직화학, 염증 인자 분석 등을 통해 검증되었습니다. 이 낭염의 실험 동물 모델은 질환의 발병 기전 및 치료를 연구하기 위한 기초를 제공합니다.

서문

낭염은 회장낭에 영향을 미치는 비특이적 염증으로, 궤양성 대장염(^UC)이 있는 개인에서 전체 직장 절제술 및 회장낭-항문 문합술(IPAA) 후 흔히 발생하는 합병증입니다^1,2,3. 이 질환은 최대 50%의 비교적 높은 발생률을 보이며 설사, 복통, 분변 출혈, 발열 등 다양한 임상 증상을 유발할 수 있습니다. 낭염의 정확한 원인은 아직 밝혀지지 않았지만, 일부 연구자들은 낭 세균총의 변화가 면역 활성화와 그에 따른 염증을 유발할 수 있다고 생각합니다 4,5,6,7.

낭염에 대한 임상시험 수행과 관련된 어려움으로 인해 동물 모델은 낭염 약물 및 메커니즘을 연구하는 데 유용한 도구가 될 수 있습니다. 쥐 회장 주머니 생성에 대한 우려가 커지고 있으며, 염증 가능성이 있다는 보고가 있다

프로토콜

모든 동물실험은 천진의과대학 종합병원 윤리위원회의 방침에 따라 진행되었습니다. 이 연구에는 약 320-360g의 체중이 나가는 9주에서 12주 사이의 수컷 Sprague-Dawley 쥐가 사용되었습니다. 사용된 시약 및 장비에 대한 자세한 내용은 재료 표에 나열되어 있습니다.

1. 동물 선택 및 유지 관리

1. 건강한 동물(체중 ~ 220-240g)을 선택하십시오.
2. 특정 병원체가 없는(SPF)¹⁵ 수준의 기준을 충족하고 적절한 환기(시간당 8-12회 공기 순환), 쾌적한 온도(20-25°C), 적절한 습도(40%-70%), 최소 소음(70데시벨 미만) 및 자연광 주기(12시간의 빛과 12시간의 어둠)가 있는 환경에서 최소 2주 동안 적응적으로 사육되어야 합니다.
3. 이 기간 동안에는 케이지 당 3-5 밀도의 표준 깨끗한 케이지에 수용하고 일주일에 두 번 침구를 교체하십시오. 실험용 쥐를 위한 표준 유지 사료뿐만 아니라 음식과 물에 대한 임시 접근을 제공합니다.

토론

궤양성 대장염(UC)은 재발성 상복부 통증, 설사, 점액 혈변을 특징으로 하는 만성 장 염증입니다. 주로 직장에 영향을 미치며 다양한 정도로 진행성 결장을 포함할 수 있습니다. 수술은 UC 17,18,19 관리에 중요한 역할을 합니다. Parks et ^al.20이 1978년 회장낭-항문 문합술(IPAA)을 이용한 전체.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anhydrous ethanol	Tianjin Fengchuan Chemical Reagent Technology Co., Ltd	China	Hematoxin-eosin Staining
Dextran Sulfate Sodium	Yeasen	60316ES76	Used to induce pouch inflammation
Formaldehyde solution	Tianjin Zhiyuan Reagent Company	China	Hematoxin-eosin Staining
Gauze	Jiangxi Zhonggan Medical Equipment Company	China	Used for animal microsurgery
Hematoxylin	Beijing Zhongshan Jinqiao Company	China	Hematoxin-eosin Staining
Interferon γ  Detection reagent kit	Cloud-clone	SEA049Ra	Detecting inflammatory factors
Interleukin-10 detection kit	Cloud-clone	SEA056Ra	Detecting inflammatory factors
Interleukin-17 detection kit	Cloud-clone	SEA063Ra	Detecting inflammatory factors
Interleukin-6 detection kit	Cloud-clone	SEA079Ra	Detecting inflammatory factors
Iodophor	Tangpai Medical Equipment Co., Ltd	China	Used for animal microsurgery
Microscopic manipulation instruments	Aesculap	Germany	Used for animal microsurgery
Occludin	abcam	ab216327	Immunohistochemical testing
Sewing needle	Yangzhou Fuda Medical Equipment Co., Ltd	China	Used for animal microsurgery
tumor necrosis factor α Detection reagent kit	Cloud-clone	SEA133Ra	Detecting inflammatory factors
Two person binocular surgical microscope	OPTON	Germany	Used for animal microsurgery
Xylene	Tianjin Yingda Rare and Precious Reagent Factory	China	Hematoxin-eosin Staining