하대정맥(Inferior Vena Cava)에서 순차적 혈액 채취 후 문맥(portal vein)을 통해 생쥐의 장내 미생물 대사산물을 평가합니다.

요약

이 프로토콜은 장내 미생물 대사 산물의 생산 및 흡수를 평가하기 위해 마우스의 문맥 및 하대정맥에서 혈액을 순차적으로 수집하는 방법을 보여줍니다.

초록

장내 미생물 제품은 장 내에서 국소적으로 작용하고 순환계로 흡수되는 것으로 알려져 있으며, 그 영향은 멀리 떨어진 수많은 장기 시스템으로 확장될 수 있습니다. 단쇄 지방산(SCFA)은 소화되지 않는 식이섬유를 발효시키는 동안 장내 미생물에 의해 생성되는 대사 산물의 한 종류입니다. 그들은 이제 장내 마이크로바이옴이 장-폐, 장-뇌 및 숙주 전체의 기타 장-장기 축을 통해 장 외 장기 시스템에 어떻게 영향을 미치는지에 대한 중요한 기여자로 인식되고 있습니다. SCFA는 결장에서 장 조직을 통해 문맥(PV)으로 흡수됩니다. 그런 다음 간을 통과하여 뇌, 근육, 지방 조직 및 폐와 같은 다양한 기관에서 소비됩니다. SCFA는 배출된 분변 물질에서 가장 쉽게 측정되지만 결장 내 분변 내용물에서 더 정확한 측정이 얻어졌습니다. 여기서 우리는 단일 피험자의 PV 및 전신 순환 혈장을 샘플링하는 것이 마우스에서 SCFA의 흡수, 수송 및 전신 수준을 연구하는 데 바람직할 수 있음을 제안합니다. 우리는 PV 및 하대정맥(IVC)에서 효율적인 혈액 샘플링을 위한 새로운 기술을 제시하여 문맥 및 전신 순환에서 상대적으로 많은 양의 혈액을 수집할 수 있습니다. 이것은 PV를 결찰함으로써 달성되며, 그로 인해 PV로 배출되는 장간막 정맥에서 다시 채워짐에 따라 PV의 확장 또는 확대를 허용합니다. 이 방법을 사용하여 성공적인 채취율과 채취된 혈액의 총량(IVC에서 최대 0.3mL, PV에서 최대 0.5mL)을 개선할 수 있었습니다.

서문

단쇄 지방산(SCFA)은 장내 미생물군에 의해 생성되는 주요 대사 산물 종류입니다. 장내 미생물군집과 다른 멀리 떨어진 장기 간의 상호 작용에서 이들이 중요한 역할을 하는 것은 염증을 조절하고, 전용 수용체를 통해 신호를 보내고, 세포 대사에서 기질 역할을 하는 방법을 설명하는 연구에 의해 뒷받침되었습니다 ^2,3,4,5. 우리 그룹의 최근 연구는 SCFA가 장-폐 축을 통한 생체 내 폐 면역 톤의 생체 내 염증 조절의 핵심이라고 제안했습니다 ^6,7. 추가 보고서에서는 장-뇌 축 ^8,9를 통해 신진 대사에 대한 기능적 영향을 설명했습니다. 전반적으로, SCFA가 숙주 생리학 및 병리학에 미치는 영향은 광범위한 질병 과정에 걸쳐....

프로토콜

이 비생존 절차의 모든 단계는 캘리포니아 대학교 샌프란시스코(University of California San Francisco)의 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았습니다. 사용된 마우스 성별 및 균주는 수컷 C57BL/6J 마우스(체중 25-35g, 12-15주 령)였습니다. 암컷 및/또는 다른 표준 마우스 균주도 사용할 수 있습니다.

1. 마취

1. 70% 에탄올 면봉으로 마우스 복부의 아래쪽 절반을 닦습니다. 트리브로모에탄올(250-400mg/kg)을 복강 내 주사하여 마취를 투여합니다. 케타민/자일라진 또는 이소플루란 마취도 사용할 수 있습니다. 각막 손상을 방지하기 위해 눈에 안과 연고를 바르십시오.
2. 진통을 위해 부프레노르핀(0.05-0.1mg/kg)을 복강내로 주사합니다.
   참고: 부프레노르핀은 개복술 절차와 관련된 통증 때문에 필요합니다.

2. 개복술

1. 마취된 마우스를 앙와위 위치의 수술 표면(아래에 가열 패드가 있음)에 놓습니다....

토론

이 논문은 동일한 실험용 마우스에서 IVC 및 PV에서 혈액 샘플을 거의 동시에 순차적으로 수집하기 위한 혁신적인 in vivo 방법에 대해 설명합니다. 이 방법은 문맥 순환을 통해 이동하는 SCFA와 같은 장내 미생물군 생성 제품의 수준을 측정하는 데 유용합니다. 마우스(체중 25-30g)에서 말기 시술 중에 수집할 수 있는 평균 최대 혈액량은 약 1mL/마우스이며, 이는 총 순환 ?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,2,2 Tribromoethanol, 97% (Avertin)	Sigma Aldrich	T48402-25G	Anesthetic agent
Buprenorphine Hydrochloride Injection 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05	Analgesic agent
Dressing Forceps	Miltex	6-100	Dissection
Graefe Forceps	Roboz	RS-5136	Dissection
Hepatin sodium 1000 USP units/mL	Hikma	NDC 0641-0391-12	Blood sample syringes/tubes heparinization
Prolene 7-0	Ethicon	8696G	Portal vein ligature
Scissors	F.S.T	14058-11	Dissection
Student Halsted-Mosquito Hemostats	F.S.T	91308-12	Dissection
Surgical tape	3M Transpore	1527-1	Mouse limbs fixation
U-100 Insulin Syringe 28G1/2	EXEL	26027	Blood sample collection