대사 기능 장애 관련 지방성 간 질환에서 지방 침착의 시험관 내 모델링

요약

이 논문에서는 대사 기능 장애 관련 지방성 간 질환의 모델로 올레산 유도 HepG2 세포를 사용하는 방법에 대해 설명합니다.

초록

대사 기능 장애 관련 지방성 간 질환(MASLD)의 유병률은 경제 및 생활 패턴의 변화로 인해 급증하여 심각한 건강 문제로 이어지고 있습니다. 이전 보고서에서는 MASLD에 대한 동물 및 세포 모델의 확립을 연구하여 이들 간의 차이점을 강조했습니다. 이 연구에서는 MASLD에서 지방 축적을 유도하여 세포 모델을 만들었습니다. HepG2 세포를 다양한 농도(0.125mM, 0.25mM, 0.5mM, 1mM)의 불포화 지방산 올레산으로 자극하여 MASLD를 모방했습니다. 모델의 효능은 세포 계수 키트-8 분석, Oil Red O 염색 및 지질 함량 분석을 사용하여 평가되었습니다. 이 연구는 MASLD 세포에 대한 작동이 간편한 세포 모델을 만드는 것을 목표로 했습니다. 세포 계수 키트-8 분석 결과에 따르면 HepG2 세포의 생존은 GI₅₀ 이 1.875mM인 올레산 농도에 따라 달라지는 것으로 나타났습니다. 0.5mM 및 1mM 그룹의 세포 생존율은 대조군보다 유의하게 낮았습니다(P < 0.05). 또한 Oil Red O 염색 및 지질 함량 분석은 HepG2 세포에서 다양한 올레산 농도(0.125mM, 0.25mM, 0.5mM, 1mM)에서 지방 침착을 검사했습니다. 0.25mM, 0.5mM, 1mM군의 지질 함량은 대조군보다 유의하게 높았다(P < 0.05). 또한, OA 그룹의 트리글리세라이드 수치는 대조군보다 유의하게 높았습니다(P < 0.05).

서문

대사기능 장애 관련 지방성 간 질환(metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease, MASLD)은 단순 지방증, 비알코올성 지방간염(NASH), 간경변증, 간세포 암종 1,2,3,4,5,6 등 다양한 질환을 포함하며, 모두 알코올 섭취 이외의 요인에 기인한다 7 . MASLD는 대사성 간 손상으로 인해 발생하는 가장 흔한 간 질환으로, 전 세계 인구의 거의 4분의 1이 영향을 받습니다 8,9,10,11,12. MASLD의 정확한 발병 기전은 아직 밝혀지지 않....

프로토콜

참고: 이 프로토콜에 사용된 모든 재료, 기기 및 시약과 관련된 자세한 내용은 재료 표를 참조하십시오.

1. 세포 배양

1. Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)(10% 소 태아 혈청[FBS], 100단위/mL 페니실린 및 100μg/mL 스트렙토마이신 포함)을 함유한 배양 플라스크에서 HepG2 세포 배양. 배양 플라스크를 5%_CO2 인큐베이터에서 37°C로 유지합니다.

2. cell counting kit-8로 측정한 올레산이 세포 생존율에 미치는 영향

1. 특정 부피의 OA를 디메틸 설폭사이드(DMSO)에 용해시켜 200mM의 농도를 달성합니다. 나중에 사용할 수 있도록 용액을 -20 °C에서 보관하십시오.
2. 웰당 6 × 10³ 개의 세포 밀도로 96웰 플레이트에 HepG2 세포를 파종합니다. 각 웰에 100μL의 DMEM을 추가합니다. 37°C에서 5% CO₂ 인큐베이터에서 24시간 동안 세포를 배양하고 배양합니다. HepG2 세포를....

토론

MASLD는 알코올 및 기타 확립된 간 손상 물질 이외의 요인으로 인해 간세포에 과도한 세포 내 지방 침착을 특징으로 하는 임상병리학적 증후군이다¹⁸. MASLD는 후천성 대사 스트레스 간 손상과 복잡하게 연결되어 있으며, 특히 인슐린 저항성 및 유전적 감수성과 관련이 있습니다. MASLD에 대한 약물을 효과적으로 연구하고 스크리닝하려면 적절한 실험 모델을 선택하는 것이 중요합니?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 µm filter	Millex
0.25% Trypsin-EDTA (1x) Trypsin-EDTA	Gibco	25200-056
0.45 µm filter	Millex
2 mL Crygenic Vials	CORNING	430659
25 cm2 Cell Culture Flask	CORNING	430639
6-well cell culture plate	CORNING	3516
96-well cell culture plate	CORNING	3599
Blood Count Plate	Shanghai Jing Jing Biochemical Reagent & Instrument Co.	02270113
Cell Counting Kit-8 assays	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	CA1210-1000T
CO2 incubator	NUAIRE	NU-5710E
DMSO Dimethyl sulfoxide	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	D8371
Dulbecco's Modified Eagle Medium	Gibco	8122691
Enzyme Labeling Equipment	Tecan	Spark
Fetal Bovine Serum, Qualified	Gibco	10099141
HepG2 cells line	Beijing North China Chuanglian Biotechnology Research Institute (BNCC)	221031
Human Triglyceride (TG) ELISA instruction	Nanjing Jiacheng Bioengineering Institute	20170301
Inverted Microscope for Cell Culture	Leica	DMi1
Isopropanol	Tianjin Zhiyuan Chemical Reagent Co.	2021030141
Oil Red Stain Kit, For Cultured Cells	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	G1262
Oleic acid	Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.	A502071
Penicillin Streptomycin	Gibco	15140122
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