In Vivo Leaf Inoculation: 줄기 구내염의 포플러 육종에서 하이브리드 클론의 질병 저항성을 평가하는 대체 방법

요약

당사는 in vivo leaf 접종 방법을 사용하여 줄기 구내염 병원균에 대한 포플러 내성을 평가하기 위한 단계별 프로토콜을 제공합니다. 이 방법은 중국의 포플러 육종 자손에서 Cytospora chrysosperma 및 Botryosphaeria dothidea 구내염 저항성의 대규모 평가에 특히 적합합니다.

초록

병원균 Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr.) 및 Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces에 의해 발생하는 줄기 구내염 중국의 포플러 농장에서 발생하는 두 가지 주요 산림 질병은 때때로 모든 포플러 묘목을 파괴하거나 성숙한 포플러 숲을 심각하게 손상시킬 수 있습니다. 잡종 육종은 나무 질병을 통제하고 관리하는 가장 직접적이고 효율적인 방법입니다. 그러나 질병 저항성을 평가하거나 체외 줄기 접종에 기반한 질병 저항성 클론을 선택하는 것은 비효율적이고 시간이 많이 걸리며 비용이 많이 들기 때문에 포플러 줄기 구내염의 하이브리드 육종 개발을 제한합니다. 이 연구에서는 in vivo leaf 접종을 통해 줄기 구내염 병원체에 대한 질병 저항성을 평가하는 대체 방법을 제안했습니다. 이 방법에 사용 된 시험 재료는 1 년 된 포플러 묘목 또는 온실이나 들판의 다년생 포플러의 연간 가지에있을 수 있습니다. 이 대체 방법의 중요한 단계는 접종 잎의 선택입니다 : 5-7^번째로 자란 잎이 가장 적합 할 수 있습니다. 잎 접종 방법의 두 번째 중요한 단계는 바늘 구멍을 통해 식물 잎에 상처를 만들어 질병의 중증도를 측정하기에 충분한 병변을 제공하는 것입니다. 포플러 육종의 초기 단계에서 생산되는 적절한 수의 잎을 위해, 이 생체 내 잎 접종은 구내염 병원균을 막기 위해 질병 저항성 포플러 클론을 빠르고 정확하며 대규모로 스크리닝하는 데 기여합니다. 또한, 이 잎 접종 방법은 줄기 줄기 구내염 병원체 C. chrysosperma, B.dothidea 또는 기타 포플러 줄기 구내염 병원체의 병원형을 스크리닝하는 효율적인 방법이기도 합니다.

서문

주로 두 개의 괴사성 병원체인 Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr. 및 Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces에 의해 발생하는 포플러 줄기 구내염 질환. 중국의 북동부, 북부 및 북서부(Three-north)에 있는 포플러 농장의 개발과 생존을 심각하게 위협합니다. 잡종 육종은 나무 질병을 통제하고 관리하는 가장 직접적이고 효율적인 방법입니다. 그러나 다수확, 빠르게 성장하는 또는 기타 포플러 잡종 클론에 대한 육종의 발전에 비해 포플러 구내염에 대한 저항성 육종에 대한 연구는 부족합니다. 질병 저항성 잡종 육종에 대한 제한된 연구^{만이 보고되었으며1,2,3}, 포플러 조림에서 구내염 저항성 잡종 클론이 재배되지 않았습니다.

정기적인 잡종 육종의 중요한 단계는 잡종 자손의 표현형 획득에 기초한 클론 선택입니다. 그러나 병리학적 표현형(병원형)을 획득하는 것은 시간이 많이 걸리고, 힘들고, 피곤하고, 비용이 많이 들고, 전문가에 ....

프로토콜

1. 구내염 병원체에 대한 진균 배양

1. 곰팡이 균주에 대한 감자 포도당 한천(PDA; 감자 추출 6.0g, 포도당 20.0g, 한천 20.0g) 배양 배지를 준비합니다. 위의 물질을 최대 1000mL의 물에 용해시키고 매체를 100 °C에서 10 분 동안 완전히 용해시킵니다.
2. PDA 배지를 25mL 튜브(각각 15.0mL 포함)에 붓습니다. 모든 튜브를 121.1°C에서 30분 동안 멸균합니다. 배지를 배양 플레이트(직경 9.0cm)에 붓고 플레이트를 실온(RT)에서 냉각합니다.
3. 28 ° C의 PDA 배지에서 7 일 동안 배양 한 곰팡이 병원체의 균사체를 ~ 0.5cm 정사각형 입방체로 자릅니다. PDA 플레이트의 중앙에 있는 곰팡이 큐브를 접종합니다(균사체 측면이 배지를 향함).
4. 온도 조절 인큐베이터(28°C, 어두운 곳에서)에서 7-10일 동안 곰팡이 병원균을 배양합니다.
5. 곰팡이 균사체가 있는 PDA 배지를 정사각형 입방체(한 변 길이 1.0-1.2cm)로 자릅니다.

2. 포플러 재료의 준비

1. 1 년 된 포....

토론

이 프로토콜은 포플러 구내염 내성 병원체에 대한 빠르고 효율적인 접종 방법을 제공하며, 이는 포플러 구내염 내성의 하이브리드 육종 및 줄기 구내염 병원체의 병원성 스크리닝과 같은 대규모 질병 내성 스크리닝이 필요한 연구 분야에 적합합니다.

이 방법의 첫 번째 핵심은 성숙한 줄기/가지 대신 새로 성숙한 잎 접종으로 질병 저항성을 평가하?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aluminum foil	Biosharp	BS-QT-027B
C. chrysosperma isolate	China Forestry Culture Collection Center	CFCC86775	Separation and preservation by our laboratory
Cytospora chrysosperma	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry	NCBI accession number: MK994101 for rRNA-ITS and MN025273 for EF1α gene   CGMCC number:40575	Separation and preservation by our laboratory
Epson Perfection V370 Photo	Epson	V370	Scanner; Scan the leaves into image
PDA (Potato Dextrose Agar)	Solarbio	P8931	Provide nutrition for fungal growth
PE plastic film			To fix fungi on the leaves
Populus alba var. Pyramidalis	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry		Cultivated by our laboratory
SPSS	IBM		Data analysis software
Thermostatic incubator	Shanghai Kuntian Laboratory Instrument Co., Ltd	KTD-6000	Provide an environment for fungal growth
Tough TG-6 camera	OLYMPUS		To take photos of diseased leaves