Dorsal Root Ganglion (DRG) Sample Preparation for Cryosectioning

마취된 쥐의 척수에서 절개한 DRG 조직을 실온에서 3시간 동안 4% 포름알데히드로 사후 고정하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 밤새 섭씨 4도에서 PBS의 30% 자당에 조직을 배양합니다. 다음으로 OCT 화합물을 추가하고 알루미늄 블록의 상단 표면을 덮어 기본 OCT를 준비합니다.

덮인 알루미늄 블록을 섭씨 영하 20도에서 5-10분 동안 얼립니다. 표면이 기본 OCT만큼 평평해질 때까지 저온 유지 장치를 사용하여 30마이크로미터 두께로 OCT의 상단을 자릅니다. 저온 유지 장치에서 알루미늄 블록을 제거하기 전에 기본 OCT의 바닥을 6:00 위치에 표시합니다.

DRG의 OCT 매립을 수행하려면 DRG 조직을 마른 페트리 접시에 놓고 마른 핀셋으로 한 위치에서 다른 위치로 두세 번 이동하여 건조시킵니다. 그런 다음 마른 핀셋을 사용하여 12:00 위치의 OCT 베이스에 마른 DRG를 놓습니다. DRG의 상단 가장자리와 베이스 OCT의 상단 가장자리 사이에 최소 5mm의 거리를 유지하고 등쪽 부분이 12:00 위치에 있고 복부 부분이 6:00 위치에 있는지 확인하십시오.

그런 다음 OCT를 원형 또는 타원형 모양으로 추가하여 DRG가 중앙에 있는 전체 DRG 조직을 포함합니다. 덮개 OCT 및 DRG 샘플을 섭씨 영하 20도에서 5분 동안 얼립니다. 완료되면 DRG가 보일 때까지 30마이크로미터 두께로 덮개 OCT의 상단을 자릅니다.