제브라피쉬에 대한 자궁근막 냉동 손상을 수행하려면 맞춤형으로 제조된 스테인리스 스틸 cryoprobe를 사용하십시오. 시술 중 프로브를 취급하는 동안 동상을 방지하려면 프로브 핸들을 피펫 팁에 삽입하고 테이프로 싸서 고정합니다. 냉동 손상 절차를 시작하기 전에 마취 작업 용액을 위한 비커, 물고기를 다루기 위한 숟가락, 촉촉한 스폰지, 물고기의 시술 후 회복을 위한 시스템 물이 담긴 탱크를 준비합니다.
화면에 표시된 단계에 따라 마취 원액을 준비하십시오. 그런 다음 준비된 저장 용액 4 밀리리터를 비커의 시스템 물 100 밀리리터에 첨가하여 트리카인 작업 용액을 준비합니다. 냉동 손상 절차를 시작하려면 프로브를 액체 질소에 최소 3분 동안 담그십시오.
스폰지를 시스템 물에 적셔 평평한 표면에 놓습니다. 그런 다음 성인 제브라 피쉬 한 마리를 트리카인 작업 용액으로 옮긴 후 1-2 분 후에 숟가락으로 물고기를 부드럽게 만져 반응이 없는지 확인하십시오. 마취 된 물고기를 젖은 스폰지에 놓습니다.
꼬리 지느러미의 뒤쪽과 꼬리 지느러미의 앞쪽에 꼬리 꽃자루를 찾습니다. 이 단계에서 액체 질소에서 크라이오 프로브를 제거합니다. 팁에 잔류 액체 질소가 남아 있지 않도록 프로브를 부드럽게 흔듭니다.
꼬리 꽃자루에 몸에 수직 인 주걱의 가장자리를 놓습니다. 조직에서 cryoprobe를 분리하기 전에 압력을 가하지 않고 6초 동안 프로브를 이 위치에 유지합니다. 그런 다음 물고기를 회수 탱크의 시스템 물로 옮깁니다.
마취에서 깨어 난 후 호흡과 수영을 재개하는 동안 물고기를 모니터링하십시오. 30 초 후에 수술 운동이 일어나지 않으면 동물이 스스로 호흡을 시작할 때까지 시스템 물을 아가미에 피펫 팅하여 물고기를 자극하십시오. 부상 후 하루 동안 대조군과 냉동 부상을 입은 물고기의 비디오 녹화 또는 DPCI에 따르면 냉동 손상된 물고기는 덜 활동적으로 헤엄쳤지만 소용돌이, 회선 또는 평형 감소와 같은 비정상적인 움직임을 나타내지 않았습니다.
축산 시스템에서, 탱크와 음식 섭취량에서의 그들의 위치는 부상 당하지 않은 물고기의 위치와 비슷했습니다. 5 DPCI에서 관찰된 바와 같이, 냉동 손상 절차가 동물의 웰빙에 심각한 영향을 미치지 않았음을 나타내는 정상적인 행동은 여전히 지속되었습니다.
