해부된 마우스 무릎 관절을 배양 접시에 넣는 것으로 시작합니다. 배양 배지를 흡인하고 신선한 배양 배지를 추가합니다. 세탁을 서너 번 반복하십시오.
그런 다음 실체 현미경으로 미세한 핀셋을 사용하여 잡아당겨 배양 배지의 모든 관절을 탈구시킵니다. 경골과 가능한 한 많은 혈관, 힘줄 및 인대를 제거하고 뼈가 부러지지 않도록주의하십시오. 샘플 당 두 개의 15 밀리리터 튜브를 준비하십시오.
핀셋을 사용하여 연조직이있는 탈구 된 뼈를 첫 번째 튜브로 옮깁니다. 양쪽 뒷발에서 얻은 각 샘플에 대해 4 밀리리터의 소화 배지를 튜브에 첨가하십시오. 잔류 세포 및 조직 단편을 수집하기 위해, 배양 배지를 해부 접시로부터 제2 15 밀리리터 튜브로 옮긴다.
배지를 500G에서 실온에서 5분 동안 원심분리합니다. 상청액을 제거한 후, 1 밀리리터의 소화 매체로 펠렛을 재현 탁시킨다. 그리고이 용액을 처음 15 밀리리터 튜브로 옮겨 거의 모든 조직, 총 5 밀리리터의 소화 매체를 포함합니다.
그런 다음 섭씨 37도에서 60 내지 120분 동안 샘플을 하이브리드화 오븐에서 진탕하여 분해한다. 인큐베이션 후, 샘플을 피펫팅으로 혼합하고, 40 미크론 셀 스트레이너를 통해 세포 용액을 50 밀리리터 튜브로 여과한다. 세포 여과기를 통해 10 밀리리터의 배양 배지를 튜브에 첨가한다.
실온에서 5분 동안 300G에서 원심분리합니다. 상청액을 제거하고 세포 펠릿을 10 밀리리터의 배양 배지로 재현탁한다. 원심분리를 반복하고, 상층액을 버리고, 2밀리리터의 배양 배지로 펠릿을 재현탁한다.
