Isolation of Synovial Fibroblasts

마우스 무릎 관절을 소화 한 후 얻은 세포 현탁액을 사용하고 콜라겐 코팅 접시에 현탁액을 뿌린다. 5%이산화탄소가 함유된 가습 분위기에서 섭씨 37도에서 1시간 동안 접시를 배양합니다. 배양 후, 피펫을 사용하여 비 부착 세포를 수집하십시오.

콜라겐이 코팅된 접시를 배양액으로 세척하고, 배지를 수거한다. 그런 다음 신선한 배지를 접시에 첨가하여 섬유아세포질 형태를 나타내는 부착 세포를 배양합니다. Hank의 균형 잡힌 소금 용액에서 0.05% 트립신으로 세포를 처리하고 하위 합류 세포를 계대시킵니다.

고순도 섬유아세포와 유사한 세포가 필요한 경우 반복적인 계대배양을 수행합니다. 통로가 5개 미만인 셀을 사용해야 합니다. 섬유아세포 유사 세포를 염증성 관절염 조직으로부터 분리하여, 7 내지 8주령의 암컷 C57BL/6 마우스에서 유도하였다.

분리된 세포의 순도는 단리된 세포에서 활막 섬유아세포 마커, 예컨대 Vcam1, Cdh11, Col6a1, 및 Csf1의 RTQPCR mRNA 발현에 의해 평가되었으며, 이는 섬유아세포가 풍부한 분획이 활막염 조직으로부터 단리되었음을 시사하였다.