초파리 미세소관 시각화를 위한 유충 해부 및 고정

길고 뭉툭한 집게를 사용하여 떠돌아다니는 초파리의 세 번째 인스타 유충을 골라내는 것으로 시작합니다. 혈림프와 같은 식염수로 유충을 씻은 다음 물티슈로 말리십시오. 다음으로, 유충을 실체 현미경 아래의 해부 접시에 등쪽 또는 배쪽에 위치시킵니다.

관찰할 조직에 따라 등쪽 또는 배쪽 절제술을 선택하십시오. 확장된 위치를 유지하기 위해 유충의 입 고리와 꼬리를 고정합니다. 다음으로 유충이 마르는 것을 방지하기 위해 혈림프와 같은 식염수 한 방울을 추가합니다.

해부 가위를 사용하여 완전히 절단하지 않고 뒤쪽 끝 가까이에 작은 가로 절개를 만듭니다. 복부 정중선을 따라 앞쪽 끝으로 이동하면서 절단을 진행합니다. 이제 유충의 모서리에 각각 4 개의 곤충 핀을 삽입하십시오.

유충의 스트레칭을 최대화하기 위해 곤충 핀을 필요에 따라 조정하십시오. 집게를 사용하여 근육에 해를 끼치지 않으면서 내부 장기를 부드럽게 제거합니다. 유충을 고정하려면 시체를 100L의 4% 파라포름알데히드에 담그고 해부 접시에 부착하십시오.

그런 다음 핀을 분리하십시오. 그런 다음 샘플을 0.2% PBST로 채워진 2mL 미세 원심분리 튜브로 옮깁니다. 15RPM에서 10분 동안 셰이커에 튜브를 놓습니다.