인간 중간엽 줄기세포를 트립신화하여 세포 현탁액을 만드는 것으로 시작합니다. 다음으로, 세포 현탁액을 1.5밀리리터 튜브에 분주하여 10개의 구조물을 만듭니다. 현탁액을 220g에서 3분 동안 원심분리한 후 진공 펌프를 사용하여 상층액을 제거합니다.
이제 세포 펠릿을 얼음 위에 놓습니다. 다음으로, 티올 변성 히알루론산, 티올 반응성 교차결합제, 폴리에틸렌 글리콜 디아크릴레이트 및 탈기된 물병을 실온에 둡니다. 멸균 상태에서는 바늘이 장착된 주사기를 사용하여 히알루론산이 들어 있는 병에 1밀리리터의 탈기수를 추가합니다.
용액을 소용돌이치게 하고 때때로 맑아질 때까지 섭씨 37도까지 가열합니다. 그런 다음 용액을 얼음 위에 놓습니다. 멸균 상태에서 가교제 병에 5mL의 탈기된 물을 추가합니다.
얼음 위에 놓기 전에 반복적으로 뒤집어서 녹입니다. 이제 120 마이크로리터의 용해된 히알루론산 용액을 분취된 세포 펠릿에 추가하고 용액을 앞뒤로 피펫팅하여 세포 펠릿을 재현탁시킵니다. 30 마이크로리터의 용해된 가교제 용액을 재현탁 세포 펠릿이 있는 튜브에 추가합니다.
튜브를 두드려 적절한 혼합을 확인하십시오. 혼합 후 용액을 간단히 회전시킵니다. 결합된 용액 15마이크로리터를 파라핀으로 코팅된 24웰 플레이트에 떨어뜨립니다.
섭씨 37도에서 30분 동안 굳힌다. in vitro 분화를 위해 0.5mL의 연골 분화 배지를 세포 장착 하이드로겔에 추가합니다. 3주 후 비대 분화 배지로 전환하여 웰당 0.5밀리리터를 추가합니다.
연골 분화는 히알루론산 또는, HA 및 콜라겐 구조체 모두에서 유형 2 콜라겐 양성 세포외 기질에서 황산염 글리코사미노글리칸을 생성했습니다. 그러나, 분포는 히알루론산 작제물에서 더 균질하였다. 콜라겐 구조체는 이질적인 형태를 가진 말초 세포를 보여주었습니다.
HA 작제물에서 세포의 평균 진원도는 콜라겐 작제물보다 높았다. 칼슘 침착은 5주에 두 구조물의 바깥쪽 가장자리에서 감지되었습니다. in vivo HA 구축물에서, 모든 임플란트는 피하 주머니에서 서로 부착되어 통합된 뼈 조직을 형성하였다.
생체 내 콜라겐 구성물의 40%는 독립적이었습니다. 라멜라 형태를 갖는 골형 조직은 이식 후 8주에 생체내 구축물 모두의 외부 영역에 형성되었습니다. 연골의 손실은 HA 구성물에서도 관찰되었습니다.
다수의 생체내 HA 작제물은 뼈 조직과의 연결 및 관절 섬유 조직의 존재에 의해 나타난 바와 같이 통합된 뼈 조직을 형성하는 것으로 나타났다. 콜라겐 구조체의 40%가 결합되어 있는 반면, 나머지 구조체는 분리되어 존재하거나 뼈 조직 연결 없이 부착되어 있습니다. 두 구조물 모두 골수에서 양성으로 표지된 혈관을 보여주었고, 내부 연골은 다핵 파골세포 세포로 둘러싸여 있었습니다.
광물은 더 큰 크기로 인해 더 높은 광물 부피와 HA 구조를 갖는 두 구조물의 외부 골형성 영역에 퇴적되었습니다.
