이전에 해동된 췌장 종양 세포 현탁액을 2밀리리터 마이크로 원심분리 튜브로 옮기는 것으로 시작하고 PBS를 추가하여 최종 부피 2밀리리터에 도달합니다. 그런 다음 혈구계를 사용하여 세포의 양과 질을 평가합니다. 원심분리를 통해 세포 펠릿을 얻은 후에는 점진적으로 더 작은 피펫 팁을 사용하여 상층액을 조심스럽게 디캔팅하여 펠릿 분포를 최소화하면서 디캔팅된 유체를 최대화합니다.
1X 세포 용해 완충액을 준비한 다음 이전에 준비한 세포 용해 희석 완충액 900 마이크로리터에 100 마이크로리터를 첨가하여 0.1X 세포 용해 완충액을 얻습니다. 100마이크로리터의 냉각된 0.1X 세포 용해 완충액을 세포 펠릿으로 옮기고 5회 부드럽게 피펫팅하여 완전한 재현탁을 보장합니다. 얼음 위에서 3분 동안 배양한 후, 1mL의 냉장 세척 완충액을 재현탁 펠릿에 넣고 5회 부드럽게 피펫팅합니다.
원심분리 후 그림과 같이 상층액을 버리고 이 세척 과정을 두 번 더 반복합니다. trypan blue-stained 현탁액을 혈구분석기에 넣어 핵의 수를 계산합니다. 목표 표적 핵 회수에 따라 1X 핵 완충액에 핵 펠릿을 재현탁시킵니다.
재현탁 핵을 40마이크로미터 피펫 팁 세포 스트레이너에 조심스럽게 통과시킨 다음 얼음 위에 유지합니다. 이제 핵을 다시 이야기하십시오. 이 방법을 사용하여 얻은 핵은 적절한 크기와 모양을 나타냈습니다.
간혹 핵 외피의 경미한 점묘가 관찰될 수 있으며 혈구계를 통한 최종 핵 평가에서 모니터링해야 합니다.
