Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis

시작하려면 헤마톡실린 및 에오신 염색 쥐의 비강 점막 조직 절편을 현미경 스테이지에 놓습니다. 이미지가 선명하게 보일 때까지 현미경의 초점을 조정합니다. 조직 이미지를 40X로 캡처합니다.

구연산염 인산염 완충액이 끓을 때까지 가열합니다. 그런 다음 열에서 제거한 후 슬라이드를 용기에 추가합니다. 끓을 때까지 8분 동안 가열한 후 8분 동안 불을 끈 다음 7분 동안 중약한 불로 전환합니다.

용기를 자연적으로 식힌 후 슬라이스를 PBS로 옮깁니다. 탈색 셰이커를 사용하여 슬라이스를 5분 동안 흔듭니다. 다음으로 면역조직화학 펜으로 말린 조직 주위에 원을 그립니다.

배양하기 전에 3% 과산화수소 용액을 슬라이스에 추가합니다. 그런 다음 이전과 같이 세척을 위해 조각을 PBS로 옮깁니다. 차단하려면 표시된 원 안에 염소 세럼 5%를 바릅니다.

배양 후 차단 용액을 조심스럽게 제거하고 조직 조각에 1-2 밀리리터의 FOXP3를 추가합니다. 그런 다음 밤새 배양하기 위해 습한 챔버에 조각을 놓습니다. PBS에서 슬라이스를 세척한 후 여과지로 슬라이스를 부드럽게 두드려 말립니다.

그런 다음 1-2 밀리리터의 2 차 항체 용액을 슬라이스에 첨가하십시오. 다음으로, 100 마이크로 리터의 티라미드 신호 증폭 작업 용액에 슬라이스를 어두운 곳에서 실온에서 10 분 동안 배양합니다. 배양 후 PBS로 슬라이스를 각각 5분씩 세 번 씻습니다.

이제 배양 전에 1-2 밀리리터의 DAPI 염색 용액을 슬라이스에 바릅니다. 10분 PBS 세척 전에 담금질기에서 5분 동안 조각을 배양하여 자동 형광을 소멸시킵니다. 그런 다음 형광 방지 담금질로 밀봉하십시오.

20X 및 40X 배율로 염색된 부분의 현미경 이미지를 캡처합니다. 대조군 쥐의 헤마톡실린(Hematoxylin)과 에오신(eosin) 염색은 잘 배열된 상피세포와 섬모를 보여주었다. 비중격 점막은 현저한 호중구 침윤이 있는 질병군에서 손상되고 분리되었습니다.

다중 면역형광 염색은 질병군에서 ROR Gamma T 및 TCAM1의 발현이 증가했음을 밝혔습니다. 그러나 FOXP3는 과소 표현되었습니다.