각 샘플에 대해 원통형 주석 호일을 만들어 임베딩 금형을 준비합니다. 최적의 절삭 온도 또는 OCT 컴파운드로 금형을 채우십시오. 그런 다음 두 개의 단열 배럴을 준비합니다.
작은 배럴에 이소펜탄을 채우고 큰 배럴에 액체 질소를 채웁니다. 근육 절개 10분 전에 작은 통을 큰 통 안에 넣으십시오. 해부를 위해 마우스를 준비하는 것으로 시작합니다.
마우스 얼굴의 피부를 잘라 교근을 노출시킵니다. 귀밑샘을 제거하여 교근의 뒤쪽 부분을 완전히 노출시킵니다. 교근의 전방 부착에서 하악골의 후방 부착까지 절개합니다.
그런 다음 근육 조직을 OCT에 담그고 화합물에 수직으로 유지합니다. 바늘 홀더를 사용하여 금형을 미리 냉각된 이소펜탄으로 옮깁니다. OCT가 하얗고 단색이 될 때까지 40초 동안 기다립니다.
신선하게 얼어붙은 근육 샘플을 라벨이 부착된 24웰 플레이트에 보관합니다. 샘플을 섭씨 20도에서 즉시 절단하거나 장기간 사용하기 위해 섭씨 80도에서 보관하십시오. 그런 다음 발목에서 무릎까지의 피부를 절개하고 근막을 제거하여 경골 전방 근육을 노출시킵니다.
미세절개 겸자의 끝을 사용하여 경골 전방의 힘줄을 분리하고 무릎까지 밀어 경골에 부착된 섬유를 끊습니다. 발목의 힘줄을 자릅니다. HE와 시리우스 레드 염색 결과, 동결 손상 시 경골 전방근이 14일 후 완전한 재생을 보였으며 형태는 온전한 대조군과 유사했습니다.
대조적으로, 교근은 동결 손상 14일 후에 손상된 근섬유 재생과 과도한 세포외 기질 침착을 나타냈습니다. 손상 14일 후 Pax7에 대한 면역조직학적 염색은 핵이 밀집되어 있지만 비례적으로 증가된 근육 위성 세포는 없는 것으로 나타났습니다. 손상 후 14일째 경골 전방근에서 중앙에 위치한 많은 수의 근섬유가 감지된 반면, 근섬유의 윤곽은 부상 부위의 교근에서 거의 눈에 띄지 않았습니다.
대신, PDGFRalpha-positive FAPs의 침윤이 관찰되었다.
