T75 플라스크에 가열된 활성 FBS, 페니실린 및 스트렙토마이신을 포함하는 DMEM에서 HEK-293T ACE2 TMPRSS2 세포를 유지하는 것으로 시작합니다. 세포 계수를 위해 20마이크로리터의 세포 현탁액과 20마이크로리터의 Trypan Blue 용액을 혼합합니다. 20 마이크로리터의 염료 혼합 셀 현탁액을 세포 계수 챔버에 추가하고 밀리리터당 셀 수를 계산합니다.
50마이크로리터의 완전한 DMEM 배지에 있는 4개의 HEK-293T ACE2 TMPRSS2 셀에 2.5배 10을 96웰 플레이트의 각 웰에 파종합니다. 섭씨 37도에서 밤새 이산화탄소 인큐베이터에서 세포를 배양합니다. 다음날 50 마이크로 리터의 DMEM을 50 마이크로 리터의 바이러스 현탁액으로 교체하고 섭씨 37도에서 18 시간 동안 배양합니다.
배양 후 각 웰에 7.5마이크로리터의 세포 용해 완충액을 넣고 오비탈 셰이커에서 2분 동안 혼합합니다. 세포가 용해되면 갓 준비한 반딧불이 루시페라아제 분석 용액을 넣고 궤도 셰이커에서 1분 동안 혼합합니다. 상용 루시페라아제 마이크로플레이트 리더를 사용하여 루시페라아제 활성을 분석합니다.
중화 항체 분석을 위해 HEK-293T 세포를 50마이크로리터의 완전한 DMEM에 파종합니다. 96웰 플레이트에 8마이크로리터의 27BV 중화 항체를 추가하고 6마이크로리터의 무혈청 DMEM으로 연속 희석을 수행합니다. 연속적으로 희석된 항체에 54마이크로리터의 Ha-CoV-2 바이러스 입자를 첨가하고 현탁액을 혼합합니다.
섭씨 37도에서 5% 이산화탄소에서 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 HEK-293T 세포가 들어 있는 웰에 50마이크로리터의 바이러스 현탁액을 추가합니다. 대조군의 경우, HEK-293T 세포만 들어 있는 웰에 50마이크로리터의 완전한 DMEM 배지를 추가합니다.
플레이트를 섭씨 37도의 인큐베이터에 18시간 동안 둡니다. 앞서 설명한 바와 같이 세포를 용해한 후 갓 준비한 반딧불이 루시페라아제 분석 용액을 넣고 1분 동안 궤도 흔들림으로 혼합합니다. 상용 루시페라아제 마이크로플레이트 리더를 사용하여 루시페라아제 활성을 분석합니다.
Ha-CoV-2 오미크론 및 오미크론 변종은 야생형 Ha-CoV-2보다 4배에서 10배 더 높은 신호를 생성하여 더 높은 감염력을 시사합니다. 항체 27 BV는 델타와 오미크론 변종 모두에 대해 중화 활성을 보였다. 오미크론에 대한 27BV의 ID50은 야생형 및 델타에 대한 ID50보다 약 10배 덜 강력했습니다.
