시작하려면 안락사된 쥐를 수술 플랫폼에 놓습니다. 수술용 가위를 사용하여 눈꺼풀을 섬세하게 제거합니다. 그런 다음 구부러진 핀셋을 사용하여 눈구멍의 반대쪽에 부드러운 압력을 가하여 눈이 바깥쪽으로 튀어나오도록 합니다.
백내장 칼을 사용하여 각막을 조심스럽게 절개하고 구부러진 핀셋을 사용하여 수정체를 조심스럽게 빼냅니다. 그런 다음 끝이 뭉툭한 곡선형 핀셋을 사용하여 5ml의 멸균 DPBS와 겐타마이신이 들어 있는 60mm 플라스틱 배양 접시에 렌즈를 옮깁니다. 겐타마이신이 함유된 DPBS 용액으로 렌즈를 부드럽게 헹굽니다.
헹굼 과정이 끝나면 렌즈를 여과지 위에 놓고 건조시킵니다. 렌즈가 충분히 건조되면 렌즈 캡슐을 제거할 준비를 하기 위해 페트리 접시의 덮개에 조심스럽게 옮깁니다. 그런 다음 렌즈를 위쪽으로 돌려 앞쪽 세그먼트가 위쪽을 향하도록 합니다.
핀셋으로 전방 캡슐을 잡고 주로 사용하는 손에 캡슐 헥시스 겸자를 사용하여 작은 찢어짐을 만듭니다. 두 도구를 반대 방향으로 부드럽게 당겨 캡슐을 제거합니다. 모든 렌즈 박리가 완료될 때까지 캡슐을 DPBS에 넣습니다.
그런 다음 렌즈 캡슐을 6웰 플레이트에 조심스럽게 옮깁니다. 각 웰에 0.05%트립신 용액 1밀리리터를 첨가하여 효소 분해 과정을 시작합니다. 트립신 용액을 부드럽게 저어 균일한 침투를 보장합니다.
플레이트를 세포 배양 인큐베이터에 넣고 캡슐을 섭씨 37도에서 8-10분 동안 소화시킵니다. 그런 다음 해부 가위를 사용하여 소화된 수정체 캡슐을 조심스럽게 다져 세포 분리를 촉진합니다. 트립신을 담금질하기 위해 10% FBS가 함유된 배양 배지 0.5mL를 추가합니다.
조직 샘플을 원심분리 튜브로 옮기고 1000G에서 5분 동안 원심분리합니다. 세포 펠릿을 방해하지 않고 상층액을 조심스럽게 제거하십시오. 1m리터의 배양 배지를 사용하여 세포를 재현탁시키고 24웰 플레이트에 세포를 파종합니다.
배양된 수정체 상피 세포의 위상 대비 이미지는 3일에서 5일 사이에 세포가 증식 단계를 시작했음을 보여주었습니다. 급속한 성장과 대수적 증식 단계는 7일에서 10일 사이에 관찰될 수 있습니다.
