생쥐에서 Bromophenol 염료의 표적 뇌 영역 미세 주입

멸균 수술 기구를 작업대에 놓는 것으로 시작합니다. 마취된 마우스를 입체 프레임에 고정하려면 위쪽 앞니를 코 클램프와 혼합하고 두 개의 이어 바(ear bar)로 머리를 고정합니다. 눈 가위를 사용하여 두피를 0.5cm 절개하여 두개골을 노출시킵니다.

3%의 과산화수소를 적신 면봉으로 노출된 두개골을 문질러 골막을 제거합니다. 두개골을 말리십시오. 드릴을 입체 기기에 부착하고 입체 암 암의 손잡이를 조정합니다.

돋보기를 사용하여 드릴 팁을 브레그마에 정확하게 위치시킵니다. LCD 디지털 디스플레이를 사용하여 브레그마에서 Z축 값을 기록합니다. 이제 드릴 팁을 람다에 놓고 Z축 값을 기록합니다.

노즈 클램프를 조정하여 두 Z 값의 차이를 최소화합니다. X의 경우 5.2를 뺀 좌표와 Y의 경우 0.8을 더한 좌표에 드릴을 배치하여 등쪽 복부 방향의 Z축 값을 측정합니다. X의 경우 5.2를 뺀 좌표에서 Y의 경우 0.8을 뺀 좌표로 드릴을 재배치하고 Z축 값을 다시 측정합니다.

이어 바를 지정된 눈금으로 조정하십시오. 드릴을 브레그마에 놓고 LCD 디지털 디스플레이의 세 좌표를 0으로 설정합니다. 참조 좌표를 사용하여 드릴을 관심 영역 위에 놓습니다.

드릴을 시작하고 드릴이 두개골을 관통할 때까지 수직 암을 사용하여 점차적으로 내립니다. 면봉을 사용하여 부스러기와 피를 제거하십시오. 브로모페놀 블루를 함유한 SDS-PAGE 로딩 버퍼 25마이크로리터와 이중 증류수 50마이크로리터를 200마이크로리터 튜브에 추가합니다.

식염수를 적신 화장솜으로 두개골 창을 덮습니다. 0.3마이크로리터의 염료를 마이크로 주사기에 넣습니다. 주사기와 전동식 stereotaxic micro injector를 stereotaxic arm에 부착합니다.

주사기 팁을 브레그마에 놓고 LCD 디지털 디스플레이에서 좌표를 0으로 설정합니다. 참조 좌표에 따라 바늘을 관심 영역으로 조정합니다. 인젝터 속도를 분당 0.1마이크로리터로 설정하고 전동식 마이크로 인젝터를 시작하여 대상 영역에 0.3마이크로리터의 염료를 공급합니다.

10분 후 인젝터를 천천히 빼냅니다.