뇌 조직 채취, 냉동 절개 및 이미징 생쥐의 입체 수술 후

시작하려면, 브로모페놀 블루 염료가 주입된 마우스를 입체구조 프레임에서 분리합니다. 마취 후 테이프로 폼 보드에 마우스를 고정합니다. 우측 심방 부속기를 1-2mm 절개합니다.

좌심실에 주입 바늘을 삽입합니다. 20 밀리리터의 예냉식 식염수를 주입한 후 20 밀리리터의 아이스 4% 파라포름알데히드 용액을 주입했습니다. 이제 목에서 코까지 정중선을 따라 절개하여 피부를 제거하고 두개골을 노출시킵니다.

집게나 가위를 사용하여 두개골에 남아 있는 근육을 제거합니다. 가느다란 가위의 한쪽 날 끝을 구멍 매그넘과 뇌 사이에 놓고 날카로운 모서리가 뼈를 향하도록 하여 중시상 봉합사의 끝에서 뼈를 향하게 합니다. 시상중간 봉합사를 따라 두개골을 부드럽게 밀어 자릅니다.

집게를 사용하여 두개골을 제거하여 뇌를 노출시킵니다. 회전식 마이크로톰 저온 유지 장치를 켠 후 챔버 온도를 섭씨 영하 20도로 설정합니다. 시편 디스크의 표면을 고르게 덮기 위해 약간의 광학 절단 온도 또는 OCT 화합물을 붓습니다.

표본 디스크를 극저온 챔버에 넣고 OCT가 응고되도록 합니다. 디스크를 시편 헤드에 부착합니다. 그런 다음 블레이드를 블록에 더 가깝게 가져오고 OCT 블록을 잘라 디스크와 평행한 평평한 평면을 만듭니다.

면도날을 사용하여 주사 부위에서 멀리 떨어진 관상 방향으로 뇌를 절편 틀에서 자릅니다. 주사 부위가 있는 뇌 조직을 절단면이 아래로 향하게 하여 OCT 평면에 놓습니다. OCT를 뇌에 붓고 디스크를 극저온 챔버에 넣어 표본 블록이 응고되도록 합니다.

대상 영역이 접근할 때까지 시편 블록을 자르고 사출 부위 수준에서 여러 섹션을 만듭니다. 차가운 작은 필기 브러시를 사용하여 관상 뇌 조각을 실온 PBS가 들어있는 6 웰 플레이트에 수집합니다. 브러시를 사용하여 6개의 웰 플레이트에서 뇌 부분을 집어 슬라이드에 놓습니다.

건조 후 뇌 부분의 주입 부위를 육안으로 관찰합니다.