시작하려면 쥐 2차 림프 조직에서 분리된 살아있는 T 림프구의 타임 랩스 이미징을 수행합니다. T 세포 이동 분석을 위해 Velocity 소프트웨어를 열고 새 이미지 시퀀스를 생성합니다. 모든 시간 랩스 비디오 현미경 동영상을 선택하고 Velocity의 파란색 영역으로 이동합니다.
대비 향상 도구를 사용하여 밝기와 대비를 수정한 다음 이미지 크기를 20x 확대의 경우 0.325마이크로미터, 10x 배율의 경우 0.65마이크로미터로 조정합니다. 시점을 설정하도록 시퀀스를 구성한 후 측정 탭으로 이동하여 모든 시점을 선택 취소합니다. 그런 다음 강도를 사용하여 물체를 찾고 막대를 피크 오른쪽으로 밉니다.
세포 파편을 방지하려면 직경이 10마이크로미터보다 작고 100마이크로미터보다 큰 모든 셀을 제외하십시오. ignore static objects(정적 객체 무시)를 선택한 다음 자동으로 끊어진 트랙을 결합합니다. 새 프로토콜을 저장하려면 측정으로 이동합니다.
save protocol(프로토콜 저장)을 클릭한 다음 name new protocol(새 프로토콜 이름)을 클릭합니다. 측정 탭에서 모든 시점 측정을 클릭하고 높은 것에서 낮은 것 순으로 시간 범위별로 트랙을 정렬합니다. 트랙이 양호한 셀의 트랙 ID 번호를 기록한 후 파일을 쉼표로 구분된 텍스트로 내보내고 데이터를 원하는 분석 소프트웨어로 전송합니다.
수동 추적을 수행하려면 이미지 J를 열고 플러그인으로 이동한 다음 추적 및 수동 추적을 선택합니다. 시간 간격 X by Y 보정, 픽셀 크기 및 Z 보정을 설정합니다. 그런 다음 트랙 추가를 클릭하여 개별 세포 추적을 시작합니다.
첫 번째 시간 지점에서 하나의 셀을 선택하고 모든 시간 지점까지 계속합니다. 마지막으로 엔드 트랙을 클릭합니다. 소프트웨어 지원 세포 추적, 다양한 색상의 선으로 표시된 활성화된 개별 T 세포의 이동 행동을 특성화했습니다.
