나노초 펄스 전기장 자극을 위한 냉동 보존된 RSC96 세포 준비

먼저 RSC96 세포 현탁액 1밀리리터가 들어 있는 크라이오 바이알을 섭씨 37도의 수조에 넣고 빠르게 흔듭니다. 세포 현탁액을 4-6 밀리리터의 완전한 배양 배지가 들어 있는 원심분리 튜브로 옮기고 잘 혼합합니다. 1, 000G에 3 5 분 동안 관을 분리하고, 그 후에 상층액을 버리고 완전한 배양 매체의 3 밀리리터에 있는 세포를 resuspend.

이제 세포 현탁액을 628mL의 완전한 배양 배지가 들어 있는 배양 플라스크에 넣고 섭씨 37도에서 밤새 배양합니다. 세포 밀도가 80-90%에 도달하면 배양 배지를 버리고 칼슘 및 마그네슘 이온이 없는 PBS로 세포를 1-2회 헹굽니다. 그런 다음 배양 플라스크에 0.25% 트립신, 0.53밀리몰 EDTA를 추가합니다.

배양이 끝나면 현미경으로 세포 분리를 관찰합니다. 대부분의 셀이 둥글고 빠르게 분리되면 플라스크를 작업 영역으로 되돌려 놓고 부드럽게 두드립니다. 소화를 멈추기 위해 10% FBS를 함유한 배양 배지 3-4밀리리터를 추가합니다.

그런 다음 플라스크의 내용물을 철저히 섞고 용액을 흡입합니다. 셀 현탁액을 원심분리합니다. 5 분 동안 1, 000G를 추가하십시오.

상층액을 버린 후, 부드러운 피펫팅으로 1-2 밀리리터의 신선한 배양 배지에 세포를 재현탁시킵니다. 셀 현탁액을 새 T25 플라스크로 옮깁니다. 1:2 비율로 배양액 7밀리리터를 추가합니다.