nsPEF(Nanosecond Pulsed Electric Field) 자극 RSC96 세포에서 신경 영양 및 전사 인자의 발현 검출

먼저, 배양 접시에서 전기 자극된 RSC96 세포를 섭취합니다. 그런 다음 조직학 펜을 사용하여 커버 슬립에 세포가 고르게 분포되어 있는 위치에 원을 그립니다. 50-100 마이크로 리터의 투과화 작업 용액을 세포에 첨가하고 실온에서 20 분 동안 배양합니다.

그런 다음 PBS로 세포를 각각 5분 동안 세 번 세척합니다. 다음으로, 원 안에 3%BSA를 첨가하여 조직을 균일하게 덮고 실온에서 30분 동안 배양합니다. 그 후, 차단 용액을 부드럽게 제거하고 적절하게 희석된 1차 항체를 세포에 추가합니다.

세포 배양 플레이트를 습한 상자에 넣고 섭씨 4도에서 밤새 배양합니다. 그런 다음 PBS로 세포를 5분씩 계속 흔들면서 세 번 세척합니다. 해당 2차 항체를 추가하고 실온에서 50분 동안 배양합니다.

배양이 끝나면 커버 슬립을 PBS에 넣고 각각 5분씩 흔들면서 3회 세척합니다. 그런 다음 슬라이드를 건조시키고 건조된 슬라이드에 DAPI 염색 용액을 추가합니다. 마지막으로, 형광을 위해 건조된 커버 슬립을 페이딩 방지 장착 매체로 밀봉합니다.

Alexa Fluor 488, SCI3 및 SCI5에 대한 특정 여기 및 방출 파장을 사용하여 이미지를 획득합니다. 현미경 분석 결과 모든 그룹에 걸쳐 흩어져 있는 세포질 S-100 베타 양성 세포가 빨간색으로 나타났으며, 대조군 및 10킬로볼트 센티미터 그룹에 비해 5킬로볼트/센티미터 그룹에서 S-100 베타 형광의 통합 광학 밀도가 증가된 것이 관찰되었습니다. 세포질이 흩어져 있는 GFAP 및 Sox10 양성 세포는 세포 크롤링 분석 중 모든 그룹에서 관찰되었습니다.

그러나 GFAP 발현은 대조군 및 10 킬로볼트 당 센티미터 그룹에 비해 5 킬로볼트 / 센티미터 그룹에서 현저히 낮았습니다. 센티미터당 5킬로볼트 그룹의 RSC96 세포는 Sox10 발현의 평균 회색 값이 상당히 높았으며, 이는 향상된 Sox10 발현을 시사합니다.