T 세포 생물학 연구를 위한 3D 인간 흉선 오가노이드 모델 준비

먼저 트롬빈과 아프로티닌을 얼음 위에서 해동하고 피브리노겐 바이알을 섭씨 37도의 수조에 넣습니다. 피펫을 사용하여 후드 아래에서 균질화합니다. 그런 다음 멸균 플라이어를 사용하여 인서트를 배양 웰에 넣고 플레이트에 적어도 하나의 열 또는 행을 비워 둡니다.

0.25밀리리터 튜브에 먼저 필요한 양의 피브리노겐과 아프로티닌을 추가합니다. 그런 다음 트롬빈을 튜브에 넣고 거품을 만들지 않고 빠르게 두 번 씻어냅니다. 튜브의 전체 내용물을 그립니다.

피펫을 인서트 중앙 위에 수직으로 놓고 기포를 생성하지 않고 시약 혼합물을 부드럽게 세척합니다. 혼합물이 불투명한 흰색으로 변할 때까지 응고를 위해 섭씨 37도에서 최소 1시간 동안 배양합니다. 오가노이드 파종의 경우, 현미경으로 미세 덩어리가 구형 세포 덩어리를 형성하고, 초기 흉선 전구 세포의 저밀도 후광으로 둘러싸인 조밀한 코러스를 확인합니다.

P200 콘의 끝을 자르고 접착 방지 용액으로 세척합니다. 플레이트를 거의 수직 위치로 기울이고 웰 바닥에서 세포 덩어리를 흡인합니다. 겔을 건드리지 않고 하이드로겔 상단에 덩어리를 섬세하게 증착합니다.

플레이트 웰에 오가노이드가 남아 있지 않은지 현미경으로 확인합니다. 그런 다음 하이드로겔 상단에 배양 배지 부피의 1/4을 건드리지 않고 천천히 추가하고 나머지 3/4을 웰 바닥에 추가합니다. 빈 배양 웰에 PBS 1ml를 추가하여 플레이트의 습도를 유지하고 37%의 이산화탄소로 섭씨 5도에서 배양합니다.

오가노이드는 구형에서 직사각형 구조를 형성하고 때때로 병합되어 하이드로겔에서 더 큰 구조를 형성합니다.