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Genetics

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합성 rho- 균주에 존재하는 구조체를 세포유도에 의해 효모 미토콘드리아 게놈에 통합

필기록

먼저 3밀리리터의 YPD 배지가 들어 있는 두 개의 튜브에 합성 rho 마이너스 세포와 수용체 효모 세포를 접종합니다. 다음 날, 750 마이크로리터의 공여체 균주와 250 마이크로리터의 수용체 균주를 멸균 마이크로튜브에 옮깁니다. 혼합물을 13, 200G에서 1분 동안 원심분리한 후, 세포 펠릿 한 방울을 YPD 플레이트에 옮기고 배양한다.

shmoos가 있는지 광학 현미경으로 배양을 확인하십시오. shmoos가 있는 경우 소량의 세포 질량을 2ml의 YPD 배지에 다시 현탁시킵니다. 회전하는 바퀴에서 섭씨 30도에서 2시간 동안 배양액을 배양합니다.

혼합물을 잘 소용돌이 치십시오. 그런 다음 세포 현탁액 10마이크로리터를 990마이크로리터의 멸균수에 희석합니다. 희석된 배양액 100마이크로리터를 수용체 균주만 성장을 촉진하는 드롭아웃 배지에 펴 바릅니다.

생성된 콜로니를 필요한 선택적 매체에 복제합니다. 양성 콜로니를 식별한 후 동일한 선택적 매체에 다시 스트리크하여 관심 미토콘드리아 DNA를 운반하는 반수체 균주를 정제합니다.

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