폐 미세혈관 밀도를 평가하기 위한 이솔렉틴 B4 염색을 위한 마우스 폐 조직 절편 준비

먼저 쥐의 폐 조직을 조직 부피의 10배인 4% 파라포름알데히드에 넣습니다. 3시간 고정 후 5개의 폐엽을 분리하고 우측 폐의 두개골, 중엽 및 부속엽을 수직엽-기관지 연결 방향으로 별도로 삽입합니다. 그런 다음 오른쪽 폐의 꼬리 엽을 폐-엽-기관지 연결에 수직인 방향으로 왼쪽에서 오른쪽으로 4mm씩 두 조각으로 자르고 절단면이 위를 향하도록 왁스 블록에 조각을 넣습니다.

왼쪽 폐엽을 세 번 절개하려면 주요 기관지 접합부 위쪽, 위쪽 2mm 아래를 가로로 절릅니다. 두 번째 절단은 주 기관지 접합부 위쪽, 상단에서 5mm 아래에 가로로 만듭니다. 로브 끝에서 상단에서 8mm 아래에 세 번째 절단을 만듭니다.

조직의 가장 위쪽 조각을 버린 후 나머지 세 조각을 왁스 블록에 넣고 절단면이 위를 향하게 합니다. 재부착 후 흐르는 물에 티슈 블록을 15분 동안 헹굽니다. 에스컬레이션되는 에탄올 농도에 조직을 순차적으로 담근 다음 크실렌과 연질 왁스를 담급게 담그십시오.

적절한 양의 액체 파라핀으로 금형을 채우고 집게를 사용하여 중앙의 임베딩 프레임에 조직을 배치합니다. 매립 기계의 냉동 영역에 금형과 티슈를 놓습니다. 파라핀이 약간 하얗게 변하기 시작하면 덮개가 없는 임베딩 프레임을 금형 위에 빠르게 놓고 두 번째 왁스 주입을 수행하여 임베딩 프레임 하단의 구멍을 밀봉합니다.

그런 다음 전체 금형을 냉동 테이블로 옮깁니다. 왁스 블록을 슬라이서에 고정한 후 블록을 다듬어 매끄럽고 평평한 절단면이 드러나도록 합니다. 마이크로톰의 휠 크랭크를 돌려 4마이크로미터 두께의 슬라이스를 자릅니다.

제거한 부분을 물 표면에 순차적으로 부드럽게 놓습니다. 단면이 완전히 확장되면 각 단면 사이의 접합부에서 깨진 조각을 분리합니다. 섹션 아래의 유리 슬라이드를 기울이고 접촉하면 수직 동작으로 물 표면에서 슬라이드를 천천히 고르게 들어 올립니다.