Isolectin B4 및 DAPI로 생쥐 폐 조직 절편을 염색하여 폐 미세혈관 밀도 시각화

시작하려면 파라핀이 박힌 쥐 폐 조직 조각을 얻어 섭씨 65도의 오븐에 60분 동안 넣습니다. 염색을 위해 조직 섹션이 있는 슬라이드를 적절한 용액이 들어 있는 염색 용기에 순차적으로 담그십시오. 개질된 구연산나트륨 항원 회수 용액을 탈이온수로 50배 희석합니다.

항원 추출물을 전자레인지에 넣고 고출력으로 예열한 후 슬라이드를 15분간 넣어 끓입니다. 슬라이드가 실온으로 식은 후 PBS로 각각 5분씩 2회 세척합니다. 그런 다음 0.25 % 트리톤으로 조직을 각각 10 분 동안 두 번 투과시킵니다.

면역조직화학 펜으로 조직을 둘러싸고 실온에서 1시간 동안 5% BSA로 슬라이드를 배양합니다. 다음으로, 이솔렉틴 B4 또는 IB4를 1% BSA로 1:50의 비율로 희석합니다. 과도한 수분을 제거한 후 희석된 IB4 50-100 마이크로리터를 섭씨 4도에서 밤새 조직 절편을 배양합니다.

PBS로 슬라이드를 각각 5분 동안 3회 세척하고 10분 동안 0.25% 트리톤으로 투과시킵니다. 그런 다음 조직 절편을 50-100 마이크로 리터의 DAPI로 실온에서 5 분 동안 배양합니다. PBS를 세 번 세척한 후 빛에 노출되지 않도록 슬라이드에 페이드 방지 장착 매체 한 방울을 바르십시오.

공기 건조 슬라이드를 형광 현미경 아래에 장착하여 핵 및 표적 신호의 이미지를 캡처합니다. 이 프로토콜은 형광 현미경으로 다양한 마우스 폐엽의 미세 내피 세포를 염색하기 위해 IB4를 사용하여 폐 미세혈관의 정확한 위치를 파악하고 관찰할 수 있습니다.