ImageJ를 사용한 이솔렉틴 B4 염색 쥐 폐엽의 미세혈관 변화에 대한 편견 없는 분석

시작하려면 이솔렉틴 B4 또는 IB4 및 DAPI 염색 마우스 폐 조직 절편을 얻습니다. 10x 대물렌즈가 있는 형광 현미경으로 이미지를 획득합니다. 이미지를 ImageJ 소프트웨어로 가져와서 선택합니다.

그에 따라 채널을 분할하고 DAPI 및 IB4 채널용 ND2 형식으로 파일을 로드합니다. Analyze(분석)로 이동하여 Scale(배율을 설정)합니다. 이미지 매개변수를 구성한 다음 글로벌을 선택한 다음 동일한 디스플레이 범위를 설정한 OK.To 이미지로 이동하여 밝기 대비를 조정하고 설정을 클릭합니다.

IB4의 표시 범위를 0에서 10, 000으로, DAPI의 표시 범위를 0에서 20, 000으로 설정합니다. 배경을 제거하려면 프로세스를 클릭한 다음 수학을 클릭합니다. 배경에서 마술 지팡이 도구로 감지한 값을 기준으로 배경 신호를 뺍니다.

최상의 임계값을 선택하려면 이미지로 이동하여 복제를 클릭합니다. 원본(Original)과 복제 이미지(Duplicate Image) 유형을 모두 8비트로 선택합니다. 그런 다음 Image(이미지) 탭에서 Adjust(조정)를 선택한 다음 Threshold(임계값) 및 Enter Modes(모드 입력)를 선택합니다.

가장 현실적인 임계값을 선택한 후 어두운 배경을 선택하고 적용합니다. 마술 지팡이 도구를 사용하여 복제된 이미지와 비교하여 더 큰 혈관을 선택한 다음 삭제를 클릭하여 큰 동맥 및 정맥에서 IB4 양성 신호를 제거합니다. 대상 신호의 수를 계산하려면 Analyze(분석)를 클릭한 다음 Set Measurements(측정 설정)를 클릭하고 Area(영역), Limit to threshold(임계값으로 제한) 및 Display label(표시 레이블)을 선택합니다.

그런 다음 입자 분석을 선택하고 크기를 0에서 무한대로, 원형도를 0에서 1로, 오버레이 마스크로 표시를 수정합니다. 요약을 선택하고 확인을 클릭합니다. 마지막으로 요약(Summary)을 선택합니다. File(파일)을 클릭하고 결과를 저장합니다.

두개골, 중간엽, 꼬리엽, 부속품 및 좌측 폐엽에서 IB4 양성 병소의 비율은 ImageJ 분석을 사용하여 젊은 마우스와 중년 마우스를 구별할 수 있었습니다.