시작하려면 50ml의 원심분리기 튜브에서 27.5ml의 폐수를 디캔팅합니다. 폴리에틸렌 글리콜 8000 13.5g과 염화나트륨 3g을 튜브에 넣고 완전히 녹을 때까지 잘 섞는다. 샘플을 섭씨 4도에서 밤새 배양합니다.
다음 날, 샘플을 15, 500g에서 섭씨 4도에서 30분 동안 원심분리합니다. 상층액을 버리고 토양 DNA 추출 키트에서 800마이크로리터의 용해 용액에 펠릿을 용해시킵니다. 그런 다음 혼합된 지르코늄 비드 튜브에 용액을 추가합니다.
20-30분 동안 최대 속도로 와류와 와류에 비드 튜브를 수평으로 고정합니다. 8, 15 초 동안 000g에 관을 회전시키십시오. 거품을 제거한 후 상층액을 1.5밀리리터 마이크로 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
15에 상층액을 분리하십시오, 1 분 동안 000g. 상층액을 깨끗한 2밀리리터의 마이크로 원심분리기 튜브에 옮기고 200마이크로리터의 침전제 용액을 추가합니다. 섭씨 4도에서 5분 동안 배양하기 전에 최대 속도로 5초 동안 소용돌이칩니다.
다시 혼합물을 원심분리하고 투명한 상층액을 깨끗한 2밀리리터 마이크로 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 상층액 700마이크로리터당 600마이크로리터의 결합 완충액을 추가합니다. 볼텍싱 후 700마이크로리터의 용해물을 실리카 스핀 컬럼에 로드하고 2분 동안 배양합니다.
15, 000g에 1 분 동안 관을 분리하고 교류를 버리십시오. 이제 스핀 컬럼을 깨끗한 2밀리리터 수집 튜브에 조심스럽게 넣습니다. 세척 완충액의 500 마이크로리터를 회전급강하 란 및 15에 분리기에 1 분 동안 000g를 추가하십시오.
플로우 스루를 버리고 스핀 컬럼을 동일한 2밀리리터 수집 튜브로 되돌립니다. 에탄올 세척 완충액의 500 마이크로리터를 회전급강하 란 및 15에 분리기, 1 분 동안 000g에 추가하십시오. 플로우 스루를 버리고 스핀 컬럼을 새 2밀리리터 수집 튜브에 넣습니다.
16에 분리기, 잔여 에탄올을 제거하기 위하여 2 분 동안 000g. 스핀 컬럼을 1.5밀리리터 튜브에 넣습니다. 예열된 뉴클레아제가 없는 물 100마이크로리터를 흰색 필터 멤브레인 중앙에 넣고 5분 동안 배양합니다.
그런 다음 15, 1 분 동안 000g에 튜브를 원심 분리하십시오. 용출된 DNA에 10마이크로리터의 3몰 염화나트륨과 250마이크로리터의 냉각된 절대 에탄올을 넣고 잘 섞이도록 뒤집습니다. 8, 15 초 동안 000g에 내용물을 회전시키십시오.
DNA 에탄올 혼합물을 섭씨 영하 20도에서 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 섭씨 4도에서 30분 동안 19, 000g에서 혼합물을 원심분리하고 튜브를 디캔팅하여 상층액을 폐기합니다. 펠릿 및 분리기에 식힌 70%에탄올의 500 마이크로리터를 19, 4 섭씨 온도에 15 분 동안 000g를 추가하십시오.
상층액을 디캔팅하고 튜브를 티슈 페이퍼에 부드럽게 두드려 잔류 에탄올을 제거합니다. 그런 다음 섭씨 37도에서 5-10분 동안 가열 블록에 튜브를 열어 DNA 펠릿을 건조시킵니다. 펠릿을 30-50 마이크로리터의 뉴클레아제가 없는 물에 재현탁시키고 섭씨 37도에서 5-10분 동안 배양합니다.
8, 15 초 동안 000g에 DNA를 회전시킨다. 핵산 설정에서 NanoDrop 분광 광도계에서 이중 가닥 DNA 애플리케이션을 선택합니다. 보푸라기가 없는 티슈와 물로 받침대를 청소하십시오.
뉴클레아제가 없는 물을 사용하여 기기를 비운 다음 받침대를 닦고 2마이크로리터의 DNA 샘플을 그 위에 로드합니다. 농도와 흡광도 비율을 측정하여 순도를 결정합니다. 측정 후 샘플을 섭씨 영하 20도에서 보관하십시오.
