고립된 뉴런 뇌에서 단세포 현탁액을 얻으려면 적절한 양의 얼음처럼 차가운 Hanks'balanced salt 용액 또는 HBSS 완충액이 포함된 사전 냉각된 15밀리리터 유리 Dounce 균질화기에 뇌를 넣습니다. 느슨한 Dounce 유봉을 사용하여 얼음 위에서 약 100-120번의 스트로크로 뇌 조직을 부드럽고 천천히 해리시킵니다. 50밀리리터 원심분리기 튜브의 70미크론 세포 여과기를 통해 생성된 뇌 조직 현탁액을 여과합니다.
Dounce 튜브를 5ml의 HBSS로 헹구고 여과를 진행하여 세포 수집을 최대화합니다. 여과된 조직 현탁액을 550g에서 섭씨 4도에서 6분 동안 원심분리합니다. 진공 흡인기(vacuum aspirator)를 사용하여 상층액을 제거하고 30% 등장 밀도 구배 용액(isotonic density-gradient solution) 1밀리리터에 세포구개를 재현탁시킵니다.
셀 현탁액을 15밀리리터 원심분리기 튜브에 옮깁니다. 적절한 양의 30% 밀도 구배 용액을 추가하고 튜브를 부드럽게 뒤집어 철저한 혼합을 보장합니다. 즉시 845g에서 가속하고 브레이크를 섭씨 4도에서 20분 동안 레벨 3으로 설정하여 튜브를 원심분리합니다.
완료되면 흔들리지 않고 원심분리기에서 튜브를 부드럽게 제거하고 진공에 연결된 1밀리리터 팁을 사용하여 상부 미엘린층을 조심스럽게 흡입합니다. 그런 다음 1-2 밀리리터를 남기고 상층액을 흡인하고 최소 10 밀리리터의 차가운 HBSS로 세포 입천장을 재현탁시킵니다. 550g에서 섭씨 4도에서 6분 동안 원심분리합니다.
최소 7ml의 차가운 HBSS로 한 번 더 세척하고 다시 원심분리합니다. 가능한 한 많은 상층액을 제거한 후, 유세포 분석을 위해 100 - 200 마이크로리터의 유세포 분석 완충액에 세포를 재현탁시킵니다.
