먼저, 멸균 가능한 일회용 메스 칼날로 분리된 뇌를 약 1제곱밀리미터 조각으로 다집니다. 다진 뇌를 새로운 멸균 50밀리리터 튜브에 조심스럽게 옮깁니다. 다진 뇌에 최종 농도 0.25%trypsin을 추가합니다.
섭씨 37도의 수조에서 20분 동안 조직을 배양합니다. 트립신을 중화하기 위해 5ml의 완전한 신경교세포 배양 배지를 추가하고 10ml의 피펫을 사용하여 조직 현탁액을 부드럽게 혼합합니다. 셀 스트레이너를 통해 셀 현탁액을 조심스럽게 디캔팅합니다.
그런 다음 멸균 1밀리리터 주사기에서 플런저를 제거하고 플런저를 사용하여 조직을 메쉬에 분쇄합니다. 신경교세포 배양 배지가 있는 1-2개의 뇌를 포함하는 동일한 부피의 세포 현탁액을 각 플라스크에 추가하면 최종 부피가 15밀리리터가 됩니다. 희박한 세포와 과도한 세포 파편이 첫날에 관찰되었습니다.
넷째 날이 되자, 부착성 성상세포(adherent astrocyte)가 생성되었습니다. 전형적인 성상교세포(astrocyte) 형태를 가진 합류 세포는 배양 8일째에 관찰되었습니다.
