Microglia-Neuron 상호 작용 연구를 위한 Primary Neurons 및 Microglia의 공동 배양

먼저, 공동 배양을 위해 T25 플라스크에서 자란 뉴런을 사용합니다. 매체를 트립신과 Dnase I.0.5 밀리리터의 소 태아 혈청을 함유한 베르센 용액 5 밀리리터로 교체하고 트립신과 Dnase I.Transfer 세포를 15 밀리리터 원추형 튜브로 옮깁니다. 수집된 뉴런을 최대화하기 위해 5ml의 완전한 신경기저 배지로 플라스크를 한 번 세척합니다.

그런 다음 셀 현탁액을 섭씨 4도에서 300G에서 5분 동안 원심분리합니다. 상층액을 버린 후, 세포 펠릿을 2-3 밀리리터의 완전한 신경기저 매체에 부드럽게 재현탁시킵니다. 세포 현탁액의 100 microliters를 각 우물에 75, 잘 당 000의 뉴런, 혼합 glia 배양의 8 10 일 사이 얻기 위하여 씨를 뿌린다.

10밀리리터 피펫을 사용하여 T75 플라스크를 아교세포 배양 배지로 부드럽게 세척하여 미세아교세포를 포집하고 세포와 배지를 멸균된 50밀리리터 원뿔형 튜브로 옮깁니다. 세포 수집을 300G에서 섭씨 4도에서 5분 동안 원심분리합니다. 상층액이 제거되면 펠릿을 2ml의 완전한 신경기저 매체에 부드럽게 재현탁시킵니다.

96 우물 신경 세포 양 판에서, neurobasal 매체의 100개 마이크로리터를 제거하고 250의 100 마이크로리터, 밀리리터 세포 현탁액 당 000 세포를 추가하십시오. 공동 배양에서는 둥글고 큰 미세아교세포가 뉴런과 신경돌기 상단 또는 사이에서 관찰되었습니다.