시작하려면 광시트 현미경을 사용하여 초기 단계의 제브라 피쉬 배아의 멀티뷰 이미지를 획득합니다. 관심 포인트가 감지되면 모든 보기를 선택하고 마우스 오른쪽 버튼을 클릭한 다음 Register using Interest Points(관심 포인트를 사용하여 등록)를 선택합니다. 등록이 얼마나 정확하게 이루어졌는지 확인하려면 두 개의 연속된 보기를 선택합니다.
겹치는 영역으로 이동하여 두 보기 사이를 전환하여 다른 각도에서 이미지화된 비드가 겹쳐지는지 관찰합니다. 성공적으로 등록한 후 멀티뷰 탐색기 창에서 저장을 클릭하여 업데이트된 XML 파일을 저장합니다. 이제 비드를 엽니다.
XML 파일을 선택하고 뷰 등록 아래의 전체 블록을 복사합니다. 배아를 엽니다. XML 파일을 열고 뷰 등록 블록을 비즈 파일에서 복사된 블록으로 바꿉니다.
그런 다음 배아를 엽니다. XML 파일을 열고 배아에 대한 등록이 성공적으로 이루어졌는지 주의 깊게 확인하십시오. 두 개의 연속적인 보기마다 관심 있는 구조의 겹침을 확인하여 비드에 대해 동일한 작업을 반복합니다.
다중 뷰 디콘볼루션을 수행하려면 비드 파일의 모든 뷰를 선택하고 마우스 오른쪽 버튼을 클릭한 다음 포인트 스프레드 함수와 추출 옵션을 선택합니다. 기본 포인트 스프레드 기능 크기를 계속 진행하고 확인을 클릭합니다. 그런 다음 XML 파일을 다시 저장합니다. 다음으로, 배아를 엽니다.
XML 파일을 만들고 각 뷰에 대해 개별적으로 포인트 확산 함수를 할당합니다. 뷰를 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고, 포인트 스프레드 함수를 클릭하고, 할당을 선택하고, 고급을 선택한 다음, 선택한 모든 뷰에 새 PSF를 할당합니다. 찾아보기를 클릭하고 XML 파일 경로로 이동하여 PSF 폴더를 엽니다.
선택한 보기에서 해당 ID와 일치하는 포인트 스프레드 기능을 선택하고 OK를 클릭합니다. 모든 뷰에 포인트 스프레드 기능을 할당한 후 마우스 오른쪽 버튼을 클릭하고 멀티뷰 디콘볼루션을 선택합니다. 경계 상자를 현재 선택된 뷰로 선택합니다. 70% epiboly에서 배아는 고분자 튜브 내에서 수평, 수직 또는 비스듬한 방향을 가정했으며 수평이 가장 적게 표현된 반면 수직 및 비스듬한 위치는 동일하게 관찰되었습니다.
위축작용 전에 샘플을 준비했을 때, 배아의 약 25%가 수평 배향을 보였다. 나머지 배아는 새싹 단계에서 다양한 다른 방향을 보였다. 그러나 그들 중 많은 사람들이 초기 소마이트 형성 동안 수평 위치로 방향을 바꿨습니다.
세포 규모 정보가 주입된 이미지를 비교한 결과, 핵 정보에서는 유의미한 차이가 나타나지 않았지만 세포 경계는 30도 세트에서 더 잘 해결되었습니다. 원본 입력 영상과 비교했을 때, 분할된 영상에는 오류가 있었습니다. 소프트웨어가 셀 경계를 감지하지 못하거나 존재하지 않는 셀 경계를 그렸습니다.
오류 수는 45도 및 60도 각도 간격으로 이미징하여 얻은 주입 이미지가 30도에 비해 크게 증가했습니다.
