11.24 : Chromatografia powinowactwa

Chromatografia powinowactwa to potężna technika szeroko stosowana do oddzielania i oczyszczania określonych biocząsteczek ze złożonych mieszanin. Wykorzystuje ona wysoce selektywne wiązanie między analitem a jego odpowiednikiem, takie jak interakcje przeciwciało-antygen. Odpowiednik jest unieruchomiony na fazie stacjonarnej, tworząc kolumnę powinowactwa. Faza stacjonarna zazwyczaj składa się ze stałego nośnika, takiego jak agaroza lub porowate szklane kulki, unieruchamiające ligand powinowactwa. Faza ruchoma służy podwójnemu celowi – wspieraniu silnego wiązania między analitem a ligandem, a następnie osłabianiu interakcji w celu wymycia analitu. Tylko analit wiąże się, gdy mieszanina zawierająca pożądany analit przechodzi przez kolumnę, podczas gdy inne substancje są przemywane. Związany analit może być następnie wymywany przez zmianę warunków, takich jak pH lub siła jonowa, co osłabia jego wiązanie.

Ta metoda jest szczególnie cenna w biochemii ze względu na swoją specyficzność i zastosowanie w izolowaniu białek, enzymów, substratów, przeciwciał, antygenów, receptorów i hormonów. Chromatografia powinowactwa może być również stosowana do izolowania pojedynczych izomerów optycznych leków, które mogą wykazywać różne efekty terapeutyczne. Proces ten obejmuje stosowanie przeciwciał monoklonalnych specyficznych dla każdego stereoizomeru.

Podstawową zaletą chromatografii powinowactwa jest jej wyjątkowa specyficzność, dzięki czemu idealnie nadaje się do szybkiej izolacji biocząsteczek w pracach przygotowawczych.