Técnicas de necropsia da raiva em animais grandes e pequenos

Resumo

O objetivo deste protocolo é demonstrar técnicas de necropsia seguras em animais pequenos e grandes para obter amostras de tecido satisfatórias para o teste de raiva.

Resumo

O laboratório de raiva do departamento de saúde de Nova York (NYSDOH) recebe entre 6.000 a 9.000 espécimes anualmente e realiza testes de raiva para todo o estado, com exceção da cidade de Nova York. Os necropsias do laboratório da raiva uma variedade de animais que variam no tamanho dos bastões aos bovids. A maioria destes espécimes são animais exibindo sinais neurológicos, no entanto, menos de 10% realmente teste positivo para a raiva; implicando trauma, lesões ou outros agentes infecciosos como a causa destes sintomas. Devido ao risco de aerosolizar agentes infecciosos não diagnosticados, o laboratório da raiva não utiliza ferramentas elétricas ou serras. Três técnicas de necropsia serão apresentadas para animais cujos crânios são impenetráveis com tesouras. O laboratório implementou essas técnicas para diminuir a exposição potencial a agentes infecciosos, eliminar a manipulação desnecessária da amostra e reduzir o tempo de processamento. As vantagens de uma técnica preferida oposto a outra estão sujeitas ao indivíduo treinado que processa o espécime.

Introdução

Trabalhar no assoalho do necropsia de um laboratório da raiva é inerentemente perigoso. Às vezes, os espécimes chegam com os Quills incorporados do porco-espinho, objetos extrangeiros que incluem setas/balas/pelotas ou fragmentos de osso expor que podem penetrar o envoltório protetor do transporte. O empacotamento impróprio pode conduzir ao escapamento, pondo em perigo indivíduos que desempacotam espécimes. Além do que ferimento físico, os técnicos do necropsia arriscam a exposição aos agentes infecciosos zoonóticos desconhecidos do CNS e dos líquidos de corpo dos espécimes. Adicionalmente, os ectoparasitas transportados pelo espécime podem transmitir outras doenças zoonóticas, pois as pulgas e carrapatos são comumente observadas em animais submetidos. Dependendo da localização geográfica e das espécies envolvidas, as doenças expostas variam. Arbovírus, como o vírus da encefalite eqüina Oriental (EEEV) ou o vírus do Nilo Ocidental (WNV), doenças transmitidas por carrapatos, incluindo doença de Lyme ou tularemia, bactérias que causam febre Q ou tuberculose, e os priões infecciosos nomeam um pequeno número dos possíveis perigos^{1 , 2. º ,} a ³.

O objetivo destes métodos é demonstrar técnicas de necropsia seguras e eficientes usando instrumentos que minimizam o potencial de aerosolização ao contrário de ferramentas elétricas ou serras^4,5. Comumente, a necropsia de pequenos animais no laboratório de raiva requer o corte dos músculos cranianos e o uso de martelo e cinzel para abrir a porção dorsal caudal do calvarium⁶. Remover esta área do calvarium expõe o cérebro traseiro, incluindo o cerebelo inteiro e a haste de cérebro craniana. Técnicas de necropsia modificadas podem ser realizadas na parte ventral do crânio, evitando os grandes músculos cranianos e regiões mais grossas do crânio. Entretanto, estas técnicas modificadas do necropsia são somente possíveis quando o espécime é sem vértebras cervicais.

Da mesma forma, o tecido cerebral em grandes animais pode ser removido separando os músculos cranianos e abrindo a porção dorsal caudal do crânio⁷. Um esforço considerável é exigido para expor o cerebelo e o tronco de cérebro porque os crânios de animais maiores são geralmente mais grossos. Para evitar penetrar no crânio, a cabeça de um animal grande é posicionada para que a porção ventro-caudal do crânio esteja voltada para o técnico. Usando instrumentos modificados, o cerebelo e o tronco encefálico são removidos através do forame Magnum. Isto é semelhante ao método de aquisição da amostra recomendado pelo laboratório de referência da União Europeia TSE para investigações de encefalopatia espongiforme transmissível (TSE)⁸. As vértebras cranianas devem ser removidas de antemão para fornecer acesso ao forame Magnum.

A aplicação destas técnicas é benéfica para técnicos adequadamente treinados em laboratórios de raiva. Enquanto o laboratório da raiva recebe amostras de vários tamanhos, dos bastões juvenis aos cavalos de esboço adultos⁹, o técnico tem diversos métodos a escolher de baseado na circunstância individual. O método demonstrado para um grande animal também é apropriado para os veterinários que realizam necropsias no campo, uma vez que o transporte de uma cabeça grande animal inteiro para o teste de raiva é complicado e caro. A implementação de qualquer uma dessas técnicas irá melhorar a segurança, diminuindo o potencial de produção de aerossóis, reduzir o manuseio da amostra e economizar tempo de processamento. No entanto, como o campo não tem as mesmas vantagens que um laboratório criado específico para o teste de raiva, é essencial que quaisquer modificações feitas nesses procedimentos se concentrem na segurança, especialmente no uso de equipamentos de proteção individual (EPI).

Protocolo

Todos os métodos descritos foram aprovados pelo Comitê institucional de cuidado e uso de animais do centro Wadsworth (IACUC).

1. preparação

1. Don PPE, com proteção ocular mínima (óculos ou escudo facial), máscara cirúrgica ou N-95 e luvas sem látex.
2. Prepare a área de trabalho, idealmente um gabinete de biossegurança (BSC), com uma cobertura de superfície de trabalho descartável (por exemplo, papel kraft ou almofadas absorventes) e instrumentos de necropsia limpos (Figura 1).
3. Coloque o espécime na superfície de trabalho e use instrumentos para manipulá-lo para avaliar a condição da amostra, incluindo evidências de decomposição, danos ao crânio, perigos potenciais (por exemplo, Quills de porco-espinho, lâminas de bisturi) e a qualidade da decapitação.

2. método ventral

Nota: quando o espécime é decapitado corretamente na linha da mandíbula, o forame Magnum e o côndilo occipital serão expostos. O método ventral é menos complicado para recuperar o cerebelo e o tronco cerebral.

1. Posicione a amostra com o lado ventral para cima e o nariz dirigindo distalmente em direção à parte de trás do BSC.
2. Segure um martelo ortopédico/malho na mão direita (se destro) e ao mesmo tempo segurar um formão vereadores na mão esquerda.
3. Posicione o cinzel em um ângulo de 45 ° com o ponto de canto do cinzel que dirige entre o lado direito do osso temporal e do osso occipital que faz uma abertura de "V".
4. Bata o topo do cinzel com o martelo até que os dois ossos separados. Faça o corte ao adjacente ao osso basisfenóide.
5. Repita no lado esquerdo do osso temporal/osso occipital (Figura 2a).
6. Dobre a área "V" do crânio para baixo com o cinzel. Expor toda a área de rombencéfalo do cérebro (cerebelo e tronco encefálico) (Figura 2b).
7. Retire o tronco cerebral e cerebelo com tesouras e fórceps. Retire todas as peças restantes do crânio se o tronco cerebral e cerebelo não saiu em uma única peça.

3. método dorsal

Nota: se a amostra tiver uma decapitação fraca (forame Magnum não visível) e o pescoço não puder ser facilmente removido durante a necropsia ou se houver suspeita de dano ao cerebelo, o método dorsal deve ser utilizado.

1. Posicione o espécime dorsalmente com o nariz dirigindo distalmente em direção à parte de trás do BSC.
2. Usando o tenacula do tumor, segure o músculo temporal esquerdo com os dentes do tenacula e trave apertando o punho.
3. Corte o músculo temporal para baixo ao osso com a faca de cinzeladura afiada.
4. Gire o espécime 180 ° com tenacula e faca (não mão) e repita o processo no músculo temporal oposto. Expor o crânio.
5. Posicione um cinzel em um ângulo de 45 ° com o ponto de canto do cinzel no centro do crânio na conjuntura do osso parietal e sulco.
6. Bata a parte superior do cinzel com um martelo até que uma abertura horizontal seja feita na metade superior do crânio no osso parietal.
7. Gire o espécime 180 ° e repita o processo no lado oposto.
8. Insira o ponto do cinzel na extremidade do corte 1 (Figura 3a) e a 90 ° de abertura horizontal. Golpeie com o martelo até que a abertura alcangue o osso occipital (aproximadamente 10 cm dependendo em cima do tamanho do espécime).
9. Enrole o espécime e repita no lado oposto no final do corte 2.
   Nota: com a amostra dorsal e nariz posicionado em direção à parte de trás do BSC, as aberturas no crânio se assemelham a um "U" de cabeça para baixo.
10. Insira os dentes da tenacula no crânio na parte inferior do "U" e levante-se para si mesmo. Expor a extremidade caudal do encéfalo e do cerebelo (Figura 3B).
11. Use a tesoura como uma colher e retire o cerebelo inteiro de dentro da cavidade.
12. Use fórceps de tecido para provocar o tronco cerebral do forame.

4. grande método animal

1. Posicione a amostra de modo que a parte dorsal do crânio esteja em contato com a superfície da necropsia com a porção caudal do crânio e o forame Magnum voltado para o técnico.
2. Insira a faca de estilete modificada no forame Magnum entre a medula espinhal e as meninges espinhais na medida do possível.
3. Pontuação em torno da medula espinhal para separar o cerebelo e tronco cerebral das meninges da coluna vertebral. Depois que a faca é inserida através do forâmen Magnum, suavemente o ângulo da faca para seguir ao longo do crânio, tanto quanto possível.
4. Insira uma espátula química ou uma colher fina e longa no espaço entre o tecido neural e as meninges espinhais.
5. Sonda em torno da medula espinhal e cerebelo para garantir a conexão com as meninges da coluna vertebral foram cortados.
6. Segure o tronco cerebral com fórceps. Com a outra mão, avance a colher rostralmente então dorsalmente para colher acima do cerebelo. Puxe simultaneamente para trás na haste de cérebro com o fórceps e retire o cerebelo usando a colher.
   Nota: pode demorar mais do que uma tentativa de recuperar cerebelo adequado para o teste de raiva.

5. pós necropsia

1. Elimine todos os materiais descartáveis (luvas, almofadas, revestimentos de área de trabalho) e os tecidos não utilizados em resíduos bioperigosos.
2. Limpe e desinfete todos os instrumentos com o método disponível (por exemplo, máquina de lavar louça industrial, autoclave, desinfetante químico, ebulição).
3. Limpe e desinfete todas as superfícies de trabalho com 20% de lixívia e/ou 70% etanol.

Resultados

Todas as amostras terrestres submetidas com crânios entre 31 de janeiro de 2019 e 28 de fevereiro de 2019 tiveram informações sobre a presença de um pescoço e o método de necropsia coletado. Durante esse tempo, 170 cabeças foram necropsiadas com 18 espécies representadas. 52% (89/170) foram Decapitated corretamente. O restante teve pelo menos uma vértebra unida que inclui três espécimes inteiros do corpo. Utilizou-se o método ventral 75% (128/170) do tempo, dos quais os pesco?...

Discussão

Espécimes submetidos à necropsia da raiva muitas vezes têm uma história de sinais clínicos compatíveis com uma doença neurológica. A presença de doença clínica pode estar associada a uma variedade de distúrbios, incluindo doenças zoonóticas, aumentando o risco para a equipe de um laboratório de infecção adquirida. Para reduzir esses riscos, foram implementadas técnicas que diminuem o manuseio e a manipulação de espécimes.

Os métodos demonstrados representam um evento de n...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chemistry spoon	Any
Curved, sharp-blunt mayo scissors	Sklar	14-2055	Sklar Operating Scissors 5-1/2 Inch Premium OR Grade Stainless Steel Finger Ring Handle Curved Sharp/Blunt
Large sharp restaurant-quality carving knife	Dexter	P94848	8" Scalloped Utility Knife, white handle
Locking tumor-tenacula	Diamond Scientific and Surgicals	N/A	Czerny Tenaculum Forcep
Modified stiletto knife (6.5 inch long blade carving knife ground to 0.5 inch wide)	Dexter	P94848	Modified 8" Scalloped Utility Knife, white handle
Orthopedic mallet-hammer	Mortech	N/A	Postmortem hammer with hook
Sharp councilman orthopedic bone chisel	Shandon	60-5	Councilman's Chisel Blade: 2 in x 2.25 in standard 7 in
Sharpened tablespoon or other long handled spoon	Any
Smooth-tipped tissue dressing forceps without teeth	Shandon	63-03	Shandon Broad Point Dressing Thumb Forceps
Powder-free non-latex gloves	Any
Safety glasses, goggles, or faceshield	Any
Surgery or N-95 mask	Any
Kraft paper, butcher paper, absorbent pad, etc	Any