Recuperação aprimorada do óleo usando uma combinação de biosurfactantes

Resumo

Ilustramos os métodos envolvidos na triagem e identificação dos micróbios produtores biosurfactantes. Também são apresentados métodos de caracterização cromatografia e identificação química dos biosurfactantes, determinando a aplicabilidade industrial do biosurfactante no aprimoramento da recuperação residual do óleo.

Resumo

Biosurfactantes são compostos ativos na superfície capazes de reduzir a tensão superficial entre duas fases de diferentes polaridades. Os biosurfactantes vêm surgindo como alternativas promissoras aos surfactantes químicos devido à menor toxicidade, alta biodegradabilidade, compatibilidade ambiental e tolerância a condições ambientais extremas. Aqui, ilustramos os métodos utilizados para a triagem de micróbios capazes de produzir biosurfactantes. Os micróbios produtores de biosurfactantes foram identificados usando o colapso da queda, a propagação do óleo e os ensaios do índice de emulsão. A produção biosufactante foi validada determinando a redução da tensão superficial da mídia devido ao crescimento dos membros microbianos. Descrevemos também os métodos envolvidos na caracterização e identificação de biosurfactantes. A cromatografia de camada fina do biosurfactante extraído seguido de coloração diferencial das placas foi realizada para determinar a natureza do biosurfactante. LCMS, ¹H NMR e FT-IR foram utilizados para identificar quimicamente o biosurfactante. Ilustramos ainda os métodos para avaliar a aplicação da combinação de biosurfactantes produzidos para melhorar a recuperação residual do óleo em uma coluna simulada de embalagem de areia.

Introdução

Biosurfactantes são as moléculas anfípáticas de superfície ativa produzidas por microrganismos que têm a capacidade de reduzir a superfície e a tensão interfacial entre duas fases¹. Um biosurfactante típico contém uma parte hidrofílica que é geralmente composta de uma moiety de açúcar ou uma cadeia de peptídeos ou aminoácidos hidrofílicos e uma parte hidrofóbica que é composta de uma cadeia de ácidos graxos saturados ou insaturados². Devido à sua natureza anfípppica, os biosurfactantes se reúnem na interface entre as duas fases e reduzem a tensão interfacial no limite, o que facilita a dispersão de uma fase para a outra ^1,3. Vários tipos de biosurfactantes que foram relatados até agora incluem glicolipídios nos quais os carboidratos estão ligados a ácidos alifáticos de cadeia longa ou hidroxia-alifáticos através de ligações éster (por exemplo, rhamnolipids, trehalolipids e sophorolipids), lipopeptides nos quais lipoides são ligados a cadeias de polipeptídeos (por exemplo, surfactina e lichenysina), e biosurfactantes poliméricas que são geralmente compostos de complexos de proteínas polissacarídeos (por exemplo, emulsano, liposano, alasan e lipomannan)⁴. Outros tipos de biosurfactantes produzidos pelos microrganismos incluem ácidos graxos, fosfolipídios, lipídios neutros e biosurfactantes^{de partículas 5}. A classe mais estudada de biosurfactídeos é a glicoslipids e entre eles a maioria dos estudos foram relatados sobre rhamnolipids⁶. Os rhamnolipids contêm uma ou duas moléculas de rhamnose (que formam a parte hidrofílica) ligadas a uma ou duas moléculas de ácido graxo de cadeia longa (geralmente ácido hidroxi-decanoico). Rhamnolipids são glicolipídios primários relatados primeiro de Pseudomonas aeruginosa⁷.

Os biosurfactantes têm ganhado cada vez mais foco em comparação com suas contrapartes químicas devido a várias propriedades únicas e distintas que oferecem⁸. Estes incluem maior especificidade, menor toxicidade, maior diversidade, facilidade de preparação, maior biodegradabilidade, melhor espuma, compatibilidade ambiental e atividade em condições extremas⁹. A diversidade estrutural dos biosurfactantes (Figura S1) é outra vantagem que lhes dá uma vantagem sobre as contrapartes químicas¹⁰. Eles são geralmente mais eficazes e eficientes em concentrações mais baixas, pois sua concentração crítica de micelas (CMC) é geralmente várias vezes menor do que os surfactantes químicos¹¹. Eles têm sido relatados como altamente termostáveis (até 100 °C) e podem tolerar maior pH (até 9) e altas concentrações de sal (até 50 g/L)¹² , assim, oferecem várias vantagens em processos industriais, que requerem exposição a condições extremas¹³. A biodegradabilidade e a menor toxicidade as tornam adequadas para aplicações ambientais, como a bioremediação. Devido às vantagens que oferecem, eles têm recebido maior atenção em várias indústrias como alimentos, agrícolas, detergentes, cosméticos e indústria petrolífera¹¹. Os biosurfactantes também ganharam muita atenção na remediação do óleo para a remoção de contaminantes de petróleo e poluentes tóxicos¹⁴.

Aqui relatamos a produção, caracterização e aplicação de biosurfactantes produzidos por Rhodococcus sp. IITD102, Lysinibacillus sp. IITD104 e Paenibacillus sp. IITD108. As etapas envolvidas na triagem, caracterização e aplicação de uma combinação de biosurfactantes para maior recuperação do óleo estão descritas na Figura 1.

Figura 1: Um método para maior recuperação do óleo usando uma combinação de Biosurfactantes. O fluxo de trabalho stepwise é mostrado. O trabalho foi realizado em quatro etapas. Primeiro, as cepas microbianas foram cultivadas e rastreadas para a produção de biosurfactantes por vários ensaios, que incluíram ensaio de colapso de queda, ensaio de espalhamento de óleo, ensaio de índice de emulsão e medição de tensão superficial. Em seguida, os biosurfactantes foram extraídos do caldo livre de células e sua natureza foi identificada por meio de cromatografia de camada fina e foram ainda identificadas usando LCMS, NMR e FT-IR. Na etapa seguinte, os biosurfactantes extraídos foram misturados e o potencial da mistura resultante para maior recuperação do óleo foi determinado utilizando-se a técnica da coluna de blocos de areia. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

A triagem dessas cepas microbianas para produzir biosurfactantes foi feita pelo colapso da queda, propagação do óleo, ensaio do índice de emulsão e determinação de redução da tensão superficial do meio livre de células devido ao crescimento dos micróbios. Os biosurfactantes foram extraídos, caracterizados e quimicamente identificados por LCMS, ¹H NMR e FT-IR. Finalmente, foi preparada uma mistura de biosurfactantes produzidos por esses micróbios e utilizada para recuperar o óleo residual em uma coluna simulada de embalagem de areia.

O presente estudo ilustra apenas os métodos envolvidos na triagem, identificação, caracterização estrutural e aplicação da combinação biosurfactante no aprimoramento da recuperação residual do óleo. Não fornece uma caracterização funcional detalhada dos biosurfactantes produzidos pelas cepas microbianas^15,16. Vários experimentos como determinação crítica de micela, análise termogravimétrica, capacidade de wettability superficial e biodegradabilidade são realizados para caracterização funcional detalhada de qualquer biosurfactante. Mas como este artigo é um artigo de métodos, o foco é a triagem, identificação, caracterização estrutural e aplicação da combinação biosurfactante no aprimoramento da recuperação residual do óleo; esses experimentos não foram incluídos neste estudo.

Protocolo

1. Crescimento de cepas microbianas

1. Pese 2 g de pó de Caldo de Luria e adicione a 50 mL de água destilada em um frasco cônico de 250 mL. Misture o conteúdo até que o pó se dissolva completamente e coma o volume de 100 mL usando água destilada.
2. Da mesma forma, prepare mais dois frascos de 100 mL de Caldo de Luria e coloque tampões de algodão no pescoço dos frascos.
3. Cubra os plugues de algodão com papel alumínio e autoclave os frascos por 15 min a 121 °C e 15 psi para esterilizar a mídia.
4. Depois de autoclaving, deixe a mídia esfriar até a temperatura ambiente.
5. Para a preparação da cultura primária de uma cepa, escolha uma única colônia de uma placa de LA usando um laço de inoculação e inoculada em um tubo de ensaio contendo 5 mL de caldo Luria estéril.
6. Incubar o tubo de ensaio durante a noite a 30 °C a 180 rpm.
7. Inocular os frascos contendo 100 mL de Caldo de Luria autoclaved adicionando 1 mL de culturas de sementes cultivadas durante a noite aos frascos dentro do armário de fluxo de ar laminar.
8. Incubar os frascos em uma incubadora rotativa a 30 °C e 180 rpm durante 7 dias.
9. Após a conclusão do período de incubação, colhia os frascos e transfira o caldo de cultura para os tubos de centrífuga. Centrifugar a cultura a 4.500 x g por 20 min em uma centrífuga refrigerada a 4 °C.
10. Suavemente, despeje a célula livre de supernasce em um béquer fresco e use-a em ensaios de triagem para produção biosurfactante.

2. Ensaios de triagem para produção biosurfactante

NOTA: Nas seções a seguir, o surfactante comercial (Saponin) foi usado como controle positivo, enquanto a água e a mídia não vacinada foram utilizadas como controle negativo.

1. Ensaio de colapso de queda
   1. Pegue uma lâmina de vidro limpa e cubra a superfície do slide com 200 μL de óleo.
   2. Adicione 20 μL da supernasce livre de células ao centro do óleo e deixe-o intacto por 2-3 min.
      NOTA: Se a queda entrar em colapso, marque o supernatante positivo para a presença de biosurfactante.
2. Ensaio de espalhamento de óleo
   1. Pegue 20 mL de água dupla destilada em uma placa de Petri (75 mm de diâmetro) e adicione 200 μL de petróleo bruto à superfície da água.
   2. Adicione 20 μL de supernanato livre de células ao centro do óleo e deixe-o intacto por 1 min.
      NOTA: Se uma zona de desobstrução for formada por causa do deslocamento do óleo, escore o positivo sobrenante para a presença do biosurfactante.
3. Ensaio do índice de emulsão (ensaio E₂₄ )
   1. Adicione 4 mL de gasolina (gasolina) e supernanato sem células cada um em um tubo de ensaio de vidro limpo.
   2. Vórtice a mistura vigorosamente por 3 min e deixá-la intacta pelas próximas 24 horas.
   3. Após 24 horas, determine o índice E₂₄ como uma porcentagem da altura da camada emulsificada (cm) em relação à altura de toda a coluna líquida (cm).
      
      NOTA: Se uma emulsão (óleo na água ou água no óleo) for observada após 24h, é provável que o supernatante contenha o biosurfactante.
4. Medição da tensão superficial
   NOTA: A tensão superficial foi medida utilizando o método do anel Du Noüy¹⁷. O instrumento utilizado neste experimento (ver Tabela de Materiais) é muito sensível, por isso garanta a limpeza adequada do vaso de vidro e da sonda.
   1. Ligue o sistema e clique duas vezes no software associado para abri-lo.
   2. Limpe o recipiente de vidro com o líquido cuja tensão superficial deve ser determinada.
   3. Adicione o líquido (40 mL) no recipiente e monte o recipiente no suporte do vaso.
   4. Desbloqueie o suporte da sonda e monte a sonda nele. Agora bloqueie o suporte da sonda pressionando o botão Travar no controlador manual.
   5. Usando o controlador manual, ajuste a altura da plataforma de modo que a sonda esteja a cerca de 2-3 mm de distância da superfície do líquido.
   6. Agora use o software para medir a tensão superficial. Clique em Arquivo localizado no painel superior esquerdo da tela. Clique em Abrir espaço de trabalho. Uma janela pop-up aparecerá.
   7. Role para baixo e clique duas vezes no ícone K100: Surface and Interfacial Tension .
   8. Agora, clique no ícone Arquivo localizado no canto superior esquerdo da tela. Clique em Novo Banco de Dados. Digite o nome para salvar os dados e clique em OK.
   9. Novamente, clique em Arquivo > Nova medição > SFT > Ring. Digite o nome para a medição. Certifique-se de que o modelo de configuração mostra o anel SFT.
   10. Preencha os detalhes na janela Configuração de medição selecionando a sonda e a nave que está sendo usada para a medição. Além disso, preencha os detalhes do líquido e da fase gasosa.
       NOTA: A fase líquida será de água, enquanto a fase gasosa será de ar. A densidade da fase líquida é a densidade do supernanato livre de células. Isso pode ser determinado tomando o peso de 50 mL do líquido e calculando a densidade como Kg/m³.
   11. Agora clique na guia Procedimento e preencha os seguintes detalhes: Velocidade de detecção: 6 mm/min, Sensibilidade de detecção: 0,005 g, Velocidade de Pesquisa: 6 mm/min, Sensibilidade à pesquisa: 0,005 g, Velocidade de Medição: 3 mm/min, Sensibilidade de Medição: 0,001 g, Profundidade de Imersão: 3 mm, Distância de Retorno: 10%, correção: Harkins & Jordan, valores máximos: 5. Clique em OK.
   12. Na janela pop-up, selecione o banco de dados para armazenar dados e clique em OK.
       NOTA: Pode-se criar um novo banco de dados aqui ou adicionar novas medidas aos dados existentes.
   13. Agora clique no botão Reproduzir localizado no centro superior da tela. O sistema começará a executar o script. Depois que o sistema estabilizar, detectará a superfície. Mergulhe a sonda no líquido, mova a sonda para frente e para trás e detecte a tensão na lamella formada.
   14. Para obter os resultados, clique no ícone Medição no lado meio-esquerdo da tela. Clique em Data e note abaixo a tensão superficial determinada.
   15. Após a conclusão da medição, baixe a altura da plataforma e desbloqueie e desmonte a sonda e o vaso do instrumento.
       NOTA: Para determinar a diminuição da tensão superficial devido à produção biosurfactante, a LB não vacinada deve ser usada como controle.

3. Extração biosurfactante

1. Ajuste o pH do supernanato livre de células para 2 usando 2 N HCl. Armazene a mistura a 4 °C durante a noite.
2. Adicione o volume igual de mistura clorofórmio-metanol (2:1) ao supernante e misture vigorosamente por 20 minutos.
3. Deixe a mistura intacta para que a separação de fase ocorra.
4. Remova a fase superior contendo água e metanol e deixe a fase inferior contendo o biosurfactante para evaporar em um capô de fumaça.
5. Após a evaporação da fase orgânica, ressolar o biosurfactante bruto cor de mel em 3 mL de clorofórmio e usar esta mistura para maior identificação e caracterização do biosurfactante.

4. Estudos de estabilidade da emulsão

1. Estabilidade de emulsão em diferentes temperaturas
   1. Tome 5 mL de supernantes livres de células em diferentes tubos de ensaio.
   2. Adicione 5 mL de gasolina a cada tubo de ensaio e misture vigorosamente por vórtice por 3 minutos.
   3. Incubar os tubos de ensaio durante a noite em diferentes banhos de água em diferentes temperaturas (30 °C, 40 °C, 50 °C, 60 °C e 70 °C).
   4. Após 24h, estime os índices de emulsão mencionados anteriormente.
2. Estabilidade de emulsão em diferentes valores de pH
   1. Tome 5 mL da supernasce sem células em tubos de ensaio limpos.
   2. Ajuste o pH de supernacantes livres de células (2, 4, 6, 8 e 10) usando 1 N HCl e 1 N NaOH.
   3. Adicione uma quantidade igual de gasolina aos tubos de ensaio e misture vigorosamente por vórtice por 3 minutos.
   4. Deixe os tubos de ensaio imperturbáveis à temperatura ambiente por 24 horas.
   5. Estime o índice de emulsão como mencionado anteriormente.
3. Estabilidade de emulsão em diferentes concentrações de sal
   1. Tome 5 mL da supernasce sem células em tubos de ensaio limpos.
   2. Adicione diferentes quantidades de sal (NaCl) aos supernantes (0 g/L, 5 g/L, 10 g/L, 20 g/L, 60 g/L e 80 g/L).
   3. Dissolva os sais nas células livres de supernaentes por vórtice por 3 minutos.
   4. Adicione uma quantidade igual de gasolina aos tubos de ensaio e misture vigorosamente por vórtice por 3 minutos.
   5. Deixe os tubos de ensaio imperturbáveis à temperatura ambiente por 24 horas.
   6. Estime o índice de emulsão após 24 h.

5. Determinando a natureza do biosurfactante

1. TLC do biosurfactante extraído
   1. Local 20 μL dos biosurfactantes em placas TLC. Ponto 2 μL de uma só vez.
   2. Localmente, os biosurfactantes em três placas TLC diferentes.
   3. Prepare uma mistura de 100 mL do eluent contendo clorofórmio:metanol (2:1) e adicione o eluente à câmara TLC. Feche a tampa da câmara e deixe-a saturar por 20 minutos.
   4. Depois de secar as placas, coloque as placas TLC dentro da câmara saturadas com uma mistura de metanol clorofórmio e execute o TLC.
   5. Depois que o eluente atingir a parte superior da placa TLC (1 cm de distância da parte superior), retire as placas e deixe-a secar.
2. Coloração para detecção de lipídios
   1. Pegue uma câmara TLC limpa e adicione alguns (5-10) grânulos de iodo na câmara fresca e saturar a câmara por 5 a 10 minutos.
   2. Coloque a placa TLC dentro da câmara e observe para o desenvolvimento das manchas amarelas. Se as manchas aparecerem, escore o biosurfactante positivo para a presença do componente lipíduo.
3. Coloração para detecção de peptídeos ou aminoácidos
   1. Prepare uma solução de ninidrina dissolvendo 0,4 g de ninidrina em 20 mL de butanol. Adicione 0,6 mL de ácido acético glacial 100% à mistura.
   2. Pulverize a placa TLC com solução de ninidrina e deixe secar o ar por 2 minutos. Aqueça a placa a 110 °C e observe o desenvolvimento da cor.
      NOTA: Se as manchas azuis aparecerem, escore o biosurfactante positivo para a presença de qualquer cadeia de peptídeo ou aminoácido.
4. Coloração para detecção de carboidratos
   1. Prepare uma solução de p-anisaldeído adicionando 2 mL de p-anisaldeído a 48 mL de ácido acético glacial contendo 1 mL de H₂SO₄. Adicione 0,6 mL de ácido acético à mistura.
   2. Pulverize a mistura uniformemente em uma placa TLC e deixe secar o ar por 2 minutos.
   3. Incubar a placa a 110 °C e monitorar o desenvolvimento das manchas.
      NOTA: Se aparecerem as manchas verdes ou pardas, escore o biosurfactante positivo para a presença de quaisquer carboidratos.

6. Identificação química do biosurfactante

1. LCMS do biosurfactante
   1. Dissolva 25 mg do biosurfactante extraído em 1 mL de clorofórmio.
   2. Execute LCMS (em uma configuração de spray de bloqueio com uma frequência de varredura de referência de 10 s) usando uma coluna C18.
   3. Use clorofórmio:metanol (1:1) como fase móvel e injete 2 μL da amostra na coluna a uma taxa de fluxo de 0,1 mL/min.
   4. Definir os parâmetros experimentais para: polaridade: ES positiva, tensão capilar: 3 kV, temperatura-fonte: 80 °C, temperatura de desolação: 300 °C, taxa de fluxo de gás dessolvação: 7.000 L/h, e fluxo de gás de captura: 0,40 mL/min.
   5. Escaneie os 100 a 1.200 Da durante um tempo de detecção de 20 minutos e pesquise os íons no modo ES positivo.
   6. Analise os valores m/z usando qualquer software de espectrometria de massa.
   7. Para análise, entre no software.
   8. Clique em Pesquisa em Lote e insira a lista das massas obtidas. Pesquise os resultados em um modo de carga positiva e use M + H e M + Na como os adutos. Mantenha a precisão de 10 PPM e marque na Estrutura de Exibição.
   9. Clique em Pesquisar e na lista de compostos, selecione aquele com o nível de PPM mais baixo.
2. ¹ H NMR do biosurfactante
   NOTA: ¹H NMR do biosurfactante foi realizado utilizando um espectrômetro NMR de 400 MHz (ver Tabela de Materiais).
   1. Dissolva 5 mg do biosurfactante em 1 mL de clorofórmio deuterado (CdCl₃).
   2. Transfira a mistura para um tubo NMR. Tampe o tubo corretamente e insira o tubo na chave inglesa. Ajuste a altura do tubo usando o tubo do ajustador.
   3. Coloque o tubo junto com a chave inglesa na máquina NMR e siga os passos mencionados abaixo para obter um espectro NMR.
   4. Para selecionar o tipo de tubo de amostra: sx N, onde N é a posição onde o tubo foi colocado (por exemplo, sx 13, se o tubo foi colocado^{na posição} 13) em software associado.
   5. Digite edc e pressione Enter para criar uma nova pasta onde os dados podem ser armazenados.
   6. Um pop-up aparecerá. Selecione o solvente clicando no CdCl ₃ na lista e digite o nome da amostra.
   7. Para iniciar o protocolo, digite "getprosol"; para travar o solvente, digite "lock cdcl3".
   8. Digite "topshim" para shim a amostra e, finalmente, digite "rga;zgefp" para adquirir os dados. Isso vai começar o protocolo.
   9. Após a obtenção do espectro, digite "apk;abs n" e pressione enter para correção de fase e linha de base.
   10. Para selecionar picos primários, digite "pp" e pressione Enter. Para selecionar apenas picos intensos, digite "mi" e digite a intensidade acima da qual os picos devem ser selecionados. O valor padrão será 0.2.
   11. Para integrar os picos, clique em Integrar e coloque o cursor no lado esquerdo do pico para ser integrado e enquanto segura o clique do cursor e arraste o cursor ao redor do pico.
   12. Salve os dados clicando em Arquivo no canto superior esquerdo e, em seguida, clique em Salvar.
   13. A amostra pode ser ejetada da máquina digitando "sx ej".
   14. Analise os picos e determine o ambiente dos átomos H.
3. Fourier Transform Infrared Spectroscopy of the biosurfactant
   NOTA: FT-IR do biosurfactante extraído foi realizado utilizando-se um espectrômetro comercialmente disponível no modo ATR (ver Tabela de Materiais).
   1. Ligue o espectrômetro e verifique o expurgo, o dessecante e o detector.
   2. Para coletar um espectro, primeiro colete o espectro de fundo sem uma amostra no lugar.
   3. Pegue o biosurfactante extraído e seque-o completamente. Coloque o biosurfactante seco diretamente sobre o cristal de diamante, aplique pressão e pressione o ponto de toque ATR.
   4. No software, selecione o número das varreduras (digite 30) e escaneie o espectro de 400 ^cm-1 a 4.000 ^cm-1.
   5. Clique em OK para adicionar o espectro de amostra à janela espectral.
   6. Clique em Arquivos > Salve > Salve As e digite o nome do arquivo seguido de extensão .spa e clique em OK.

7. Aplicação biosurfactante (recuperação aprimorada do óleo)

NOTA: Neste experimento, a água dupla destilada foi utilizada como controle negativo e 10% SDS, 10% Tween 80 e 10% saponina comercial foram utilizadas como controles positivos.

1. Pegue o vidro e sele a tomada inferior com lã de vidro e contas de vidro.
2. Embalar a coluna com solo arenoso de tal forma que algum líquido possa ser adicionado na parte superior do solo e o fluxo através pode ser coletado na parte inferior. Monte a coluna no suporte e adicione algumas contas de vidro em cima do solo.
3. Inunde a coluna com 50 mL de solução de salmoura e colete o fluxo através para determinar o volume dos poros.
   volume de poros = volume de salmoura adicionado em cima - volume de fluxo através de coletado.
4. Remova a salmoura da coluna forçando o petróleo cru a passar por ela depois de adicionar a partir da parte superior da coluna. Colete o volume da salmoura e do óleo que sai da coluna para determinar o volume inicial de saturação do óleo. O volume da salmoura liberada da coluna será o volume inicial de saturação do óleo ou o óleo original no local.
5. Deixe a coluna intacta por 24 h.
6. Após 24h, alagule a coluna com 10 volumes de poros de salmoura e recolhe o óleo que sai da coluna para estimar a recuperação secundária do óleo. O óleo deixado na coluna após a recuperação secundária do óleo corresponde ao óleo residual.
7. Prepare uma mistura de biosurfactantes adicionando volumes iguais do biosurfactante extraído (extraído após a etapa 3.5) ao béquer de vidro. Adicione os biosurfactantes ao topo da coluna e incubar a coluna por 24h.
8. Após 24 horas, meça a quantidade de óleo e água para determinar a recuperação adicional ou aprimorada do óleo. O volume do óleo liberado da coluna corresponderá ao óleo residual recuperado.
9. Estimar uma recuperação aprimorada do óleo com a seguinte equação:
   

Resultados

Três cepas bacterianas (Rhodococcus sp. IITD102, Lysinibacillus sp. IITD104 e Paenibacillus sp. IITD108) foram rastreadas para a produção de biosurfactantes por vários ensaios, que incluíram ensaio de colapso de queda, ensaio de deslocamento de óleo, ensaio do índice de emulsão e redução da tensão superficial. Supernantes livres de células de todas as três cepas bacterianas e uma solução de surfactante químico resultaram em um colapso de queda e, portanto, foram pontuados positi...

Discussão

Os biosurfactantes são um dos mais versáteis grupos de componentes biologicamente ativos que estão se tornando alternativas atraentes para surfactantes químicos. Eles têm uma ampla gama de aplicações em inúmeras indústrias, como detergentes, tintas, cosméticos, alimentos, produtos farmacêuticos, agricultura, petróleo e tratamento de água devido à sua melhor capacidade de lintibilidade, menor CMC, estrutura diversificada e simpatia ambiental¹⁸. Isso levou a um maior interesse em desco...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 ml pipette	Eppendorf, Germany	G54412G
1H NMR	Bruker Avance AV-III type spectrometer,USA
20 ul pipette	Thermo scientific, USA	H69820
Autoclave	JAISBO, India	Ser no 5923	Jain Scientific
Blue flame burner	Rocker scientific, Taiwan	dragon 200
Butanol	GLR inovations, India	GLR09.022930
C18 column	Agilent Technologies, USA	770995-902
Centrifuge	Eppendorf, Germany	5810R
Chloroform	Merck, India	1.94506.2521
Chloroform-d	SRL, India	57034
Falcon tubes	Tarsons, India	546041	Radiation sterilized polypropylene
FT-IR	Thermo Fisher Scientific, USA	Nicolet iS50
Fume hood	Khera, India	47408	Customied
glacial acetic acid	Merck, India	1.93002
Glass beads	Merck, India	104014
Glass slides	Polar industrial Corporation, USA	Blue Star	75 mm * 25 mm
Glass wool	Merk, India	104086
Hydrochloric acid	Merck, India	1003170510
Incubator	Thermo Scientific, USA	MaxQ600	Shaking incubator
Incubator	Khera, India	Sunbim
Iodine resublimed	Merck, India	231-442-4	resublimed Granules
K12 –Kruss tensiometer	Kruss Scientific, Germany	K100
Laminar air flow cabnet	Thermo Scientific, China	1300 Series A2
LCMS	Agilent Technologies, USA	1260 Infinity II
Luria Broth	HIMEDIA, India	M575-500G	Powder
Methanol	Merck, India	107018
Ninhydrin	Titan Biotech Limited, India	1608
p- anisaldehyde	Sigma, USA	204-602-6
Petri plate	Tarsons, India	460090-90 MM	Radiation sterilized polypropylene
Saponin	Merck, India	232-462-6
Sodium chloride	Merck, India	231-598-3
Test tubes	Borosil, India	9800U06	Glass tubes
TLC plates	Merck, India	1055540007
Vortex	GeNei, India	2006114318
Water Bath	Julabo, India	SW21C