Ligadura parcial do nervo ciático: um modelo murino de dor neuropática crônica para estudar o efeito antinociceptivo de novas terapias

Resumo

A ligadura parcial do nervo ciático induz dor neuropática crônica de longa duração, caracterizada por respostas exageradas a estímulos térmicos e mecânicos. Este modelo murino de dor neuropática é comumente usado para estudar terapias inovadoras para o tratamento da dor. Este artigo descreve em detalhes o procedimento cirúrgico para melhorar a padronização e reprodutibilidade.

Resumo

O manejo da dor crônica permanece desafiador até hoje, e os tratamentos atuais estão associados a efeitos adversos, incluindo tolerância e dependência. A dor neuropática crônica resulta de lesões ou doenças no sistema somatossensorial. Para investigar potenciais terapias com efeitos colaterais reduzidos, modelos de dor em animais são o padrão-ouro em estudos pré-clínicos. Portanto, modelos bem caracterizados e bem descritos são cruciais para o desenvolvimento e validação de terapias inovadoras.

A ligadura parcial do nervo ciático (NPNs) é um procedimento que induz dor neuropática crônica em camundongos, caracterizada por hipersensibilidade mecânica e térmica, dor contínua e alterações na temperatura do membro, tornando esse modelo um ótimo ajuste para estudar a dor neuropática pré-clinicamente. O NPNp é um modelo vantajoso para o estudo da dor neuropática, pois reproduz muitos sintomas observados em humanos com dor neuropática. Além disso, o procedimento cirúrgico é relativamente rápido e simples de ser realizado. O NPNp unilateral de um membro permite a comparação entre as patas ipsilateral e contralateral, bem como a avaliação da sensibilização central.

Para induzir hipersensibilidade neuropática crônica, um fio de nylon inabsorvível 9-0 é usado para ligar o terço dorsal do nervo ciático. Este artigo descreve o procedimento cirúrgico e caracteriza o desenvolvimento de dor neuropática crônica por meio de múltiplos testes comportamentais comumente utilizados. Como uma infinidade de terapias inovadoras estão sendo investigadas para o tratamento da dor crônica, este artigo fornece conceitos cruciais para a padronização e uma descrição precisa das cirurgias necessárias para induzir dor neuropática.

Introdução

A dor crônica é um problema de saúde significativo em todo o mundo e é um dos problemas de saúde mais caros nos Estados Unidos. O tratamento da dor crônica é mais bem conduzido quando as modalidades farmacológica e não farmacológica são utilizadas de forma multidisciplinar¹. O manejo da dor crônica é desafiador e, em alguns casos, não trata adequadamente a dor². Portanto, métodos novos e complementares são necessários para melhorar o tratamento da dor crônica, e modelos animais são cruciais para investigar terapias inovadoras.

A dor neuropática crônica resulta de lesões ou doenças no sistema s....

Protocolo

Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade do Arizona e estão em conformidade com as diretrizes para o uso de animais de laboratório do National Institutes of Health (publicação do NIH nº 80-23, 1966). Camundongos C57Bl6/J adultos livres de patógenos (peso no teste: 22-28 g) foram alojados em gaiolas de camundongos do biotério padrão (cinco camundongos por gaiola) em salas climatizadas em um ciclo claro/escuro de 12 h e tiveram acesso a comida e água ad libitum. Todos os experimentos comportamentais foram conduzidos por experimentadores cegos para as condições de tratamento.

Resultados

A dor neuropática crônica foi induzida pela ligadura parcial do nervo ciático de camundongos machos C57Bl6/J (Figura 1A). A sensibilidade mecânica foi avaliada utilizando-se filamentos de von Frey e o método "up-and-down". A sensibilidade térmica ao calor foi avaliada pelos testes de Hargreaves e placa quente. Todos os dados foram analisados com ANOVA two-way para medidas repetidas com correção de Geisser-Greenhouse para comparar o efeito da cirurgia de NPNp em animais simulados ao l.......

Discussão

O tratamento da dor crônica muitas vezes requer medicação de longo prazo, tornando o tratamento da dor desafiador. Assim, os modelos pré-clínicos são uma ferramenta essencial para avaliar os potenciais benefícios de terapias inovadoras baseadas em abordagens farmacológicas ou não farmacológicas. Os inúmeros modelos de dor crônica neuropática trazem desafios devido ao aumento da variabilidade nas técnicas cirúrgicas entre diferentes pesquisadores, levando à redução da reprodutibilidade. Assim, é essenci.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
5/0, FS-2, 30" Undyed PGA Braided Polyglycolic Acid Synthetic Absorbable Suture	CP Medical	421A	https://cpmedical.com/suturesearch/product/421a-visorb-50-fs-2-30/
6/0, P-1, 18" Blue Polypropylene Monofilament Non-Absorbable Suture	CP Medical	8697P	https://cpmedical.com/suturesearch/product/8697p-polypro-60-p-1-18/
9/0 (0.3 metric) Nylon Black Monofilament Suture	Crestpoint Ophthalmics	MANI 1407	https://crestpointophthalmics.com/mani-1407-suture-trape-spatula-nylon-black-mono-box-of-12.html
Allodynia Software	National Instruments, LabView 2015		Quantification of mean withdrawal thresholds (Von Frey data)
C57Bl6/J mice	The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME	000664	https://www.jax.org/strain/000664
Castroviejo needle holder	Fine Science Tools	12565-14	https://www.finescience.com/en-US/Products/Wound-Closure/Needle-Holders/Castroviejo-Needle-Holder/12565-14
Cold Hot Plate Test	Bioseb	BIO-CHP	https://www.bioseb.com/en/pain-thermal-allodynia-hyperalgesia/563-cold-hot-plate-test.html
Elevated metal mesh stand for Von Frey	Bioseb	BIO-STD2-EVF	https://www.bioseb.com/en/pain-mechanical-allodynia-hyperalgesia/1689-elevated-metal-mesh-stand-30-cm-height-to-fit-up-to-2-pvf-cages.html
Extra fine Graefe forceps	Fine Science Tools	11152-10	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-curved-medium-point-general-purpose-forceps/16100110
Fine Castroviejo needle holder	Simovision/Geuder	17565	https://simovision.com/assets/Uploads/Brochure-Geuder-Ophthalmic-Surgical-Instruments-EN2.pdf
Fine scissors (11.5 cm)	Fine Science Tools	14558-11	https://www.finescience.com/en-US/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-Tungsten-Carbide-ToughCut%C2%AE/14558-11
Fine scissors (9 cm)	Fine Science Tools	14558-09	https://www.finescience.com/en-US/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-Tungsten-Carbide-ToughCut%C2%AE/14558-09
Iris forceps	Fine Science Tools	11064-07	https://www.finescience.com/en-US/Products/Forceps-Hemostats/Fine-Forceps/Iris-Forceps/11064-07
Micro Adson forceps	Fine Science Tools	392487	https://www.fishersci.com/shop/products/micro-adson-tissue-forceps-1x2-teeth-german-steel/13820072#?keyword=adson%20forceps
Modular holder cages for rats and mice	Bioseb	BIO-PVF	https://www.bioseb.com/en/pain-mechanical-allodynia-hyperalgesia/1206-modular-holder-cages-for-rats-and-mice.html
Moretti/Effetre #240 Light Cobalt Blue glass rods 4 mm	Ebay	N/A	https://www.ebay.com/itm/402389491328?hash=item5db0485e80:g:agYAAOS w9CtfnIVJ&amdata=enc %3AAQAHAAAAwCoqvgWRo NTe5Vq8PWOgfE4ygWeW4tL k81J1AFu%2Fkcbsk6pxYtJi6 digE5TL9SzlgMzYUMNDr%2B dku2%2B%2FEvB1qXqFmebE 020SGs9LPDXLL5w21un7jrM0 9xfWYvIzBYQYh6FRWyUJngC uuA9Bkjb9lxtZoYlg5y6PyFR2P 34xFk5xaNC5ib65M1%2Fr%2F 4w2Iw45QqsSyXH2cuUKRom0 AGBoBaIr%2BbJw1VnlMjGuc9dtx 4fbPbqoBNSWjj3RbZPOPTYS8Q %3D%3D%7Ctkp%3ABk9SR4q6- 6LfYA
Plantar Test for Thermal Stimulation - Hargreaves Apparatus	Ugo Basile	37570	https://ugobasile.com/products/categories/pain-and-inflammation/plantar-test-for-thermal-stimulation
Touch-Test Sensory Evaluators, Set of 20 Monofilaments	North Coast Medical	NC12775-99	https://www.ncmedical.com/products/touch-test-sensory-evaluators_1278.html
Tying forceps	Duckworth & Kent	2-504ER8	https://duckworth-and-kent.com/product/tying-forceps-9/