Implantação e Avaliação do Melanoma na Coroide Murina via Tomografia de Coerência Óptica

Resumo

O presente protocolo descreve o implante e a avaliação do melanoma em coroide murina utilizando tomografia de coerência óptica.

Resumo

O estabelecimento de modelos experimentais de melanoma de coroide é um desafio em termos da capacidade de induzir tumores na localização correta. Além disso, as dificuldades na observação in vivo do melanoma de coroide posterior limitam a localização do tumor e a avaliação do crescimento em tempo real. A abordagem aqui descrita otimiza as técnicas para o estabelecimento do melanoma de coroide em camundongos por meio de um procedimento de injeção de células B16LS9 subcoroidal em várias etapas. Para permitir a precisão na injeção nas pequenas dimensões da úvea do rato, o procedimento completo é realizado sob um microscópio. Primeiro, uma peritomia conjuntival é formada na área dorso-temporal do olho. Em seguida, um trato no espaço subcoroidal é criado inserindo uma agulha através da esclera exposta. Isto é seguido pela inserção de uma agulha romba no trato e a injeção de células de melanoma na coroide. Imediatamente após a injeção, a tomografia de coerência óptica (OCT) não invasiva é utilizada para determinar a localização e a evolução do tumor. O descolamento de retina é avaliado como preditor da localização e tamanho do tumor. O método apresentado permite a indução reprodutível de melanoma localizado em coroide em camundongos e a avaliação do crescimento tumoral em imagens ao vivo. Como tal, fornece uma ferramenta valiosa para o estudo de tumores intraoculares.

Introdução

O melanoma uveal (UMT) é a neoplasia maligna primária intraocular mais frequente em adultos. Aproximadamente 90% dos melanomas oculares originam-se de melanócitos da região coroide do trato uveal¹. A UMTT é uma importante causa de morbidade e mortalidade, pois estima-se que cerca de 50% dos pacientes desenvolvam doença metastática, sendo o fígado o principal sítio de metástase2. O tratamento precoce das lesões primárias pode reduzir a chance de metástases, porém nenhum tratamento efetivo previne a formação de metástases³.

O tratamento padrão do melanoma uveal inclui ter....

Protocolo

Os experimentos do protocolo foram aprovados pelo Conselho Nacional de Experimentação Animal de Israel e estão de acordo com a Declaração ARVO para uso de Animais em Pesquisa Oftalmológica e de Visão. Camundongos C57BL/6 fêmeas, com idade entre 8-10 semanas, foram utilizados para o presente estudo e foram expostos a ciclos claro-escuro de 12/12 h. Os animais foram obtidos de fonte comercial (ver Tabela de Materiais).

1. Cultura celular

1. Cultura de células B16LS9 em meio RPMI 1640, suplementado com 10% de soro fetal bovino, 2 mM de L-glutamina, 1 mM de piruvato de sódio, 25 mM de HEPES, 1% de mistur....

Resultados

Os olhos foram examinados via OCT imediatamente após a injeção das células B16LS9. Descolamento local de retina foi observado após a injeção. Os camundongos exibiram três padrões de RD: focal (Figura 2, painel superior), vazamento para o vítreo (Figura 2, painel médio) e RD estendida (Figura 2, painel inferior). A DR estendida é provavelmente causada por danos causados pela injeção. Houve associação entre o .......

Discussão

O melanoma uveal é uma doença devastadora para a qual novas abordagens terapêuticas são extremamente necessárias. No entanto, a pesquisa sobre melanoma uveal e potenciais tratamentos é limitada pelos desafios técnicos dos modelos animais de melanoma uveal ^1,25. Os tumores oculares, que são induzidos pela injeção intraocular de células cancerosas, são altamente variáveis em localização e tamanho, provavelmente devido às pequenas dimensões do olho .......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
10 μL glass syringe (Hamilton Co., Bonaduz, Switzerland)	Hamilton	721711
30 G needles	BD Microbalance	2025-01
Atipamezole hydrochloride	Orion Phrma
B16LS9 cells	from Hans Grossniklaus USA
Buprenorphine	richter pharma	102047
C57BL/6 female mice	Envigo
Essential vitamin mixture	satorius	01-025-1A
Fetal bovine serum	rhenium	10270106
HEPES	satorius	03-025-1B
Hydroxyethylcellulose 1.4% eye drops	Fisher Pharmaceutical	390862
InSight OCT segmentation software	Phoenix Micron, Inc
Ketamine	bremer pharma GMBH (medimarket)	17889
L-glutamine	satorius	03-020-1B
Medetomidine	zoetis (vetmarket)	102532
Ofloxacin 0.3% eye drops	allergan	E92170
Optical coherence tomography	Phoenix Micron, Inc
Oxybuprocaine 0.4%	Fisher Pharmaceutical	393050
Penicillin-streptomycin-amphoteracin	satorius	03-033-1B
Phosphate buffered saline (PBS)	satorius	02-023-1a
RPMI cell media	satorius	01-104-1A
Sodium pyruvate	satorius	03-042-1B
Surgical microscope	Zeiss	OPMI-6 CFC
Tropicamide 0.5%	Fisher Pharmaceutical	390723