Transplante de Traqueia Intrapulmonar Purino: Modelo para Investigação de Doença Obliterativa das Vias Aéreas Após Transplante Pulmonar

Resumo

O modelo de transplante traqueal intrapulmonar murino (TTPI) é valioso para o estudo da doença obliterativa das vias aéreas (DAO) após o transplante pulmonar. Oferece informações sobre o comportamento imunológico e angiogênico pulmão-específico na obliteração das vias aéreas após alotransplante com alta reprodutibilidade. Descrevemos aqui o procedimento do IPTT e seus resultados esperados.

Resumo

O transplante traqueal intrapulmonar murino (TTPI) é usado como modelo de doença obliterativa das vias aéreas (DAO) após transplante pulmonar. Inicialmente relatado por nossa equipe, esse modelo tem ganhado uso no estudo da DAO devido à sua alta reprodutibilidade técnica e adequação para investigação de comportamentos imunológicos e intervenções terapêuticas.

No modelo IPTT, um enxerto traqueal de roedor é inserido diretamente no pulmão do receptor através da pleura. Esse modelo é distinto do transplante traqueal heterotópico (TCTH), em que os enxertos são transplantados para sítios subcutâneos ou omentais, e do transplante traqueal ortotópico (TTO), no qual a traqueia do doador substitui a traqueia do receptor.

O sucesso da implementação do modelo IPTT requer habilidades anestésicas e cirúrgicas avançadas. As habilidades anestésicas incluem intubação endotraqueal do receptor, ajuste de parâmetros ventilatórios apropriados e extubação adequadamente cronometrada após a recuperação da anestesia. As habilidades cirúrgicas são essenciais para a colocação precisa do enxerto dentro do pulmão e para garantir o selamento eficaz da pleura visceral para evitar vazamento de ar e sangramento. Em geral, o processo de aprendizagem leva aproximadamente 2 meses.

Em contraste com os modelos HTT e OTT, no modelo IPTT, a via aérea do aloenxerto desenvolve obliteração das vias aéreas no microambiente pulmonar relevante. Isso permite que os investigadores estudem os processos imunológicos e angiogênicos específicos do pulmão envolvidos na obliteração das vias aéreas após o transplante pulmonar. Além disso, esse modelo também é único por exibir órgãos linfoides terciários (TLOs), que também são vistos em aloenxertos pulmonares humanos. Os TLOs são compostos por populações de células T e B e caracterizados pela presença de vênulas endoteliais elevadas que direcionam o recrutamento de células imunes; portanto, é provável que desempenhem um papel crucial na aceitação e rejeição do enxerto. Concluímos que o modelo IPTT é uma ferramenta útil para estudar as vias imunes e pró-fibróticas intrapulmonares envolvidas no desenvolvimento da obliteração das vias aéreas no aloenxerto de transplante pulmonar.

Introdução

O transplante pulmonar tem sido estabelecido como um tratamento eficaz para pacientes com doenças respiratórias em estágio terminal. Entretanto, a sobrevida mediana dos receptores de transplante pulmonar humano é de apenas aproximadamente 6 anos, sendo o desenvolvimento de bronquiolite obliterante (BO), um tipo de doença obstrutiva das vias aéreas (DAO), uma das principais causas de morte após o primeiro ano pós-transplante¹.

Vários modelos animais têm sido utilizados para investigar o mecanismo subjacente à DAO. Um desses modelos é o transplante traqueal heterotópico (TCT)². Nesse modelo, os ....

Protocolo

Todos os animais foram tratados de acordo com as diretrizes estabelecidas pelo Conselho Canadense de Cuidados com Animais no Guide to the Care and Use of Experimental Animals. O protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de Cuidados com Animais do Toronto General Hospital Research Institute, University Health Network.

1. Cirurgia do doador

NOTA: Camundongos BALB/c são usados como exemplo de doadores para o experimento. Todos os procedimentos devem ser realizados utilizando técnica estéril.

1. Antes do procedimento, registre o peso de cada mouse.
2. Eutanásia do rato utilizando ....

Discussão

O procedimento murino IPTT inclui etapas críticas. Em relação à anestesia, o primeiro passo crucial é a intubação endotraqueal. É essencial segurar o rato a uma altura adequada com as pernas sobre a mesa para visualizar as cordas vocais e facilitar a intubação imediata. Além disso, é necessário um ajuste cuidadoso do volume respiratório e da pressão expiratória final positiva (PEEP). Normalmente, um volume respiratório de 500 μL e uma PEEP de 2 cmH₂O são suficientes para camundongos pesando .......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
BALB/cJ	The Jackson Laboratory	8-10 weeks 25-30 g	Male, Donor
BD 1 mL Syringe	Becton Dickinson	309659
BD PrecisionGlide Needle Aiguile BD PrecisionGlide	Becton Dickinson	305122
Bovie Change-A-Tip Deluxe High-Temperture	Bovie	DEL1
C57BL/6J	The Jackson Laboratory	8-10 weeks 25-30 g	Male, Recipient
Dumont #5/45 Forceps	F·S·T	11251-35
Ethicon Ligaclip Multiple -Clip Appliers-	Ethicon	LX107
Extra Fine Graefe Forceps	F·S·T	11150-10
Glover Bulldog Clamp	Integra	320-127
Halsted-Mosquito Hemostats	F·S·T	13009-12
Horizon Titanium Ligating Clips	Teleflex	001201
Leica M651 Manual surgical microscope for microsurgical procedures	Leica
Magnetix Fixator with spring lock	CD+ LABS	ACD-001
Microsurgical Scissor	Jarit	277-051
Mouse and Perinatal Rat Ventilator Model 687	Harvard	55-0001
Perfadex Plus	XVIVO	19850
Retractor Tip Blunt - 2.5 mm	CD+ LABS	ACD-011
small animal table	CD+ LABS	ACD-003
Surgipro Blue 24" CV-1 Taper, Double Armed	Covidien	VP702X
Systane ointment	Alconn	1444062
System Elastomer	CD+ LABS	ACD-007
Terumo Surflo IV Catheter, 20 G x 1 in	Terumo Medical Corporation	SR-OX2025CA
VMT table Top	benson	91803300