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Cultura de Laboratório e de Campo de Larvas de Lapa Chinelo ( Crepidula fornicata
Neste Artigo
Resumo
O artigo apresenta métodos para cultura larval do gastrópode Crepidula fornicata em um sistema de pequeno volume em escala laboratorial e em um sistema de mesocosmo ambiente-água do mar que pode ser implantado no campo.
Resumo
O molusco gastrópode calipso, Crepidula fornicata, tem sido amplamente utilizado para estudos de biologia, fisiologia e ecologia do desenvolvimento larval. Larvas de veliger chocadas desta espécie foram coletadas por sifonagem em uma peneira após liberação natural por adultos, distribuídas na cultura a uma densidade de 200/L e alimentadas com Isochrysis galbana (cepa T-ISO) a 1 x 105 células/mL. O crescimento da concha e a aquisição de competência para metamorfose foram documentados para larvas irmãs criadas em culturas ventiladas de 800 mL projetadas para equilíbrio ao ar ambiente ou a misturas de gases atmosféricos definidas. Contrastando com essas condições de cultura de laboratório; Dados de crescimento e competência também foram coletados para larvas criadas em um mesocosmo de água do mar ambiente de 15 L localizado em uma população de campo de adultos reprodutivos. As taxas de crescimento e o tempo de competência metamórfica nas culturas de laboratório foram semelhantes aos relatados em estudos publicados anteriormente. As larvas criadas no mesocosmo do campo cresceram muito mais rápido e se metamorfosearam mais cedo do que o relatado em qualquer estudo de laboratório. Juntos, esses métodos são adequados para explorar o desenvolvimento larval sob condições controladas predeterminadas em laboratório, bem como em condições naturais no campo.
Introdução
A lapa deslizante, Crepidula fornicata (Gastropoda: Calyptraeidae), está bem representada na literatura de pesquisa atual e histórica devido à sua utilidade como modelo de desenvolvimento e por causa de seus impactos generalizados como espécie invasora. Ele serviu como um exemplo fundamental do desenvolvimento espiraliano na era clássica da embriologia experimental1 e experimentou um renascimento de interesse com a aplicação de ferramentas modernas de imagem e genômica para dissecar os mecanismos do desenvolvimento inicial dos lofotrocozoários 2,3. No outro extremo de sua histó....
Protocolo
1. Manobras de rotina para estabelecimento e manutenção de culturas larvais de C. fornicata
NOTA: Este método começa com um galão (3,8 L) de água do mar contendo C. fornicata adulto que acabou de liberar larvas de veliger chocadas. Os adultos podem ser coletados em campo ou obtidos de um fornecedor fornecido na Tabela de Materiais. Os adultos são hermafroditas protândricos que vivem em pilhas de acasalamento com fêmeas sésseis chocando na parte inferior da pilha. Não quebre as pilhas de adultos. A sazonalidade da reprodução e os métodos de condicionamento de adultos para desova fora da estaç....
Resultados Representativos
O crescimento larval e a aquisição de competência para metamorfose foram medidos em 4 repetições simultâneas das culturas ventiladas de 800 mL, cada uma contendo 160 larvas, derivadas de um lote irmão de larvas que eclodiram de uma única massa de ovo e que foram alimentadas com Isochrysis galbana a uma densidade de 1 x 105 células/mL. O pH foi de 7,9-8,0, a temperatura foi de 20-21 °C e a salinidade foi de 30-31 ppt. O crescimento e a metamorfose também foram determinados com um lote irmão.......
Discussão
Embora as larvas de C. fornicata sejam relativamente fáceis de cultivar em comparação com outras larvas marinhas planctotróficas, a atenção aos fundamentos das boas práticas de cultivo ainda é essencial17,19. As larvas saudáveis devem começar a se alimentar imediatamente após a eclosão. Isso é facilmente verificado no dia seguinte à eclosão, observando suas entranhas cheias, repletas de células de algas, usando um microscópio de disseca?.......
Divulgações
Não há conflitos de interesse a serem relatados.
Agradecimentos
O desenvolvimento inicial do sistema de cultura ventilada de baixo volume foi apoiado em parte pela National Science Foundation (CRI-OA-1416690 para Dickinson College). A Dra. Lauren Mullineaux gentilmente cedeu instalações laboratoriais na Woods Hole Oceanographic Institution, onde os dados apresentados para este sistema (Figura 4) foram coletados.
....Materiais
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bucket, Polyethylene, 7 gallon | US Plastic | 16916 | for mesocosm |
| Crepidula fornicata | Marine Biological Laboratory, Marine Resources Center | 760 | adult broodstock |
| Hotmelt glue, Infinity Supertac 500 | Hotmelt.com | INFINITY IM-SUPERTAC-500-12-1LB | good for bonding polyethylene |
| Jar, glass, 32 oz, with polypropylene lid | Uline | S-19316P-W | for 800 mL ventilated cultures |
| Nitex mesh, 236 µm | Dynamic Aqua Supply Ltd. | NTX236-136 | for mesocosm |
| Nut, hex, nylon, 10-32 thread | Home Depot | 1004554441 | for fastening tubing barbs |
| Rivets, nylon, blind, 15/64" diameter, 5/32"-5/16" grip range, pack of 8 | NAPA auto parts | BK 6652844 | 4 packs needed per mesocosm |
| Tubing barb 1/8" x 10-32 thread | US Plastic | 65593 | 2 needed per culture jar |
| Tubing, polyethylene, 2.08 mm OD | Fisher Scientific | 14-170-11G | for ventilating gas stream inside culture jar |
| Tubing, Tygon, 1/8"x3/16"x1/32" | US Plastic | 57810 | fits barbs for ventilating cultures |
Referências
- Conklin, E. G. The embryology of Crepidula: a contribution to the cell lineage and early development of some marine gastropods. Gasteropods. , (1897).
- Henry, J. J., Collin, R., Perry, K. J.
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