Tecnologia 2D-HPLC-MS combinada com rede molecular para a identificação de componentes na medicina tibetana Aconitum pendulum

Resumo

Este estudo utiliza a tecnologia bidimensional de cromatografia líquida de alta eficiência-espectrometria de massa (2D-HPLC-MS) em conjunto com redes moleculares para desvendar a intrincada composição química da planta medicinal tibetana Aconitum pendulum Busch (APB). O artigo fornece um protocolo detalhado para a exploração sistemática e identificação de componentes químicos complexos de medicamentos fitoterápicos.

Resumo

Neste estudo, uma abordagem abrangente foi empregada, utilizando a tecnologia 2D-HPLC-MS em conjunto com a rede molecular para desvendar a intrincada composição química da planta medicinal tibetana APB. Através da implementação de HPLC 2D, foi alcançada uma separação aprimorada de misturas complexas, permitindo o isolamento de compostos individuais para análise subsequente. A abordagem de rede molecular auxiliou ainda na elucidação das relações estruturais entre esses compostos, contribuindo para a determinação de potenciais moléculas bioativas. Essa estratégia integrada identificou com eficiência uma ampla gama de componentes químicos presentes na planta. Os resultados revelaram um espectro diversificado de constituintes químicos dentro do APB, incluindo alcalóides, entre outros. Esta pesquisa não apenas avança na compreensão do perfil fitoquímico desta medicina tradicional tibetana, mas também fornece informações valiosas sobre suas potenciais propriedades terapêuticas. A integração de 2D-HPLC-MS e rede molecular prova ser uma ferramenta poderosa para explorar e identificar sistematicamente composições químicas complexas em medicamentos fitoterápicos, abrindo caminho para mais pesquisas e desenvolvimento no campo da descoberta de produtos naturais.

Introdução

A medicina tibetana é parte integrante da medicina tradicional chinesa, aderindo aos princípios das práticas médicas tibetanas, e é usada para prevenção e tratamento de doenças¹. No entanto, a fitoterapia tibetana contém constituintes químicos vegetais complexos caracterizados por flutuações significativas no conteúdo. A compreensão limitada dos elementos bioativos fundamentais tornou-se um gargalo na modernização da medicina tibetana². A aplicação da cromatografia líquida-espectrometria de massas (LC-MS), combinando o forte poder de separação da cromatografia com a alta sensibilidade da espectrometria de massas (MS), te....

Protocolo

1. Preparação

1. Preparação da amostra
   1. Use uma balança de sensibilidade de 1/10.000 para pesar 0,25 g (peso seco) de APB em um tubo de microcentrífuga de 3 mL, adicione 2,5 mL de metanol e depois sonique por 30 min (potência 240 W, frequência 40 kHz).
   2. Efectuar centrifugação a 1,2 x g durante 5 min, recolher o sobrenadante e filtrar através de um filtro de membrana com um tamanho de poro de 0,22 μm.
2. Preparação de materiais experimentais
   1. Prepare a fase móvel bidimensional, use acetonitrila como fase orgânica da fase B e configure água ultrapura de ácido fórmico a 0,1% como fase aquosa A.

Discussão

O foco principal deste experimento foi a otimização de um método parcial dentro da estrutura de separação bidimensional de fases líquidas. Para conseguir isso, um novo modulador de diluição na coluna foi perfeitamente integrado ao sistema de cromatografia líquida bidimensional (2D-LC). Esse ajuste técnico foi de suma importância, pois elevou significativamente a proficiência no perfil dos constituintes químicos presentes na medicina tibetana conhecida como APB. A incorporação da tecnologia 2D-HPLC-MS permi.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acetonitrile	Fisher chemical	F22M81203	Mobile phase
Aconitum pendulum	/	/	Herb medicine
Agilent 1290 Infinity (II) 2D-LC	Agilent Technologies	G2198-90001	Liquid chromatography
Disposable syringes	Chengdu Keen experimental equipment	/	1ml
EP tube	Chengdu Keen experimental equipment	/	3ml
Liquid phase injection bottle	Chengdu Keen experimental equipment	/	1.5ml
LTQ XL Mass Spectrometer	Thermo Fisher	LTQ21991	Mass Spectrometer
Microporous membranes	Chengdu Keen experimental equipment	/	0.22μm
Ultimate XB-C18,5 μm,2.1 x 200 mm	Welch	00201-31015	Reversed-phase column
Ultrasonic Cleaner	GT Sonic	UGT20DEC048Y	Ultrasonic Cleaner 240W 40KHz
XAmide,3 μm,100A	Dalian Mondi Technology	D2019110601	Hydrophilic column