Um método modificado para cateterismo intratecal em ratos

Resumo

Aqui, apresentamos um método modificado para cateterismo intratecal em ratos que representa uma abordagem simples, conveniente e confiável para a administração repetitiva de medicamentos intratecais.

Resumo

O cateterismo intratecal tem sido amplamente aplicado em experimentos com animais, especialmente aqueles sobre dor neuropática. No entanto, os métodos tradicionais ainda apresentam várias limitações. Embora alguns pesquisadores tenham tentado melhorar os métodos tradicionais, os métodos disponíveis ainda precisam ser modificados. Aqui, apresentamos um método modificado para cateterismo intratecal em ratos.

Este método usa um fio de aço inoxidável de 20 cm de comprimento (0,2 mm de diâmetro), um tubo plástico PE10 de 15 cm de comprimento, uma tampa de vedação de fabricação própria e uma faixa antialérgica de 0,3 cm × 0,5 cm. Nosso método modificado para cateterismo intratecal tem várias vantagens. Primeiro, a introdução de um fio de aço inoxidável no tubo PE10 aumenta a elasticidade do tubo, melhora a taxa de sucesso do cateterismo intratecal, reduz a quantidade de espaço necessária para a operação e minimiza os danos aos tecidos ao redor da coluna lombar. Em segundo lugar, o comprimento do tubo PE10 é determinado antes da cirurgia, e o tempo de permanência do cateter pode ser superior a uma semana. Terceiro, o tubo PE10 é fixado por uma sutura em forma de 8, 4 vezes, o que evita o movimento e a retração do tubo quando o animal se move. Em quarto lugar, uma tampa de vedação feita por você mesmo é usada para vedar o tubo PE10, o que não apenas evita o vazamento de líquido cefalorraquidiano, mas também reduz a necessidade de corte repetido do tubo PE10. Finalmente, a extremidade extracorpórea do tubo PE10 é amarrada com uma faixa, o que evita a retração do tubo quando o animal se move.

Esse método pode aumentar a taxa de sucesso do cateterismo em ratos, pois aproximadamente 80% dos tubos de PE10 permaneceram no local mesmo 28 dias após a cirurgia. Assim, esse método modificado pode representar uma abordagem simples, conveniente e confiável para a administração repetitiva de medicamentos intratecais.

Introdução

O cateterismo intratecal (também conhecido como cateterismo subaracnóideo) em ratos é um método que envolve a inserção de um cateter no espaço subaracnóideo através do espaço intervertebral¹. Os medicamentos são injetados diretamente no espaço subaracnóideo através do cateter, o que ajuda os pesquisadores a investigar os efeitos dos medicamentos na medula espinhal sem considerar os efeitos dos medicamentos que penetram na barreira hematoencefálica ^2,3. Além disso, o líquido cefalorraquidiano pode ser coletado após cateterismo intratecal para investigar o microambiente do sistema nervoso central ^4,5. O método atualmente utilizado para cateterismo intratecal foi estabelecido pela primeira vez por Yaksh e Rudy⁶ em 1976 e, desde então, tem sido amplamente aplicado em experimentos com animais nas áreas de neurociência, anestesia e analgesia, regulação cardiovascular mediada pela medula espinhal e, especialmente, dor neuropática ^2,7. No entanto, esse método ainda apresenta várias limitações, como alta incidência de lesão medular, hemorragia subaracnoidea, disfunção sensitiva e motora pós-operatória, alta mortalidade pós-operatória e alto risco de comprometimento neurológico 4,5,8,9,10 . Na tentativa de superar essas limitações, a cateterização do espaço subaracnóideo através dos interespaços lombares foi proposta por Størkson et al. em 1996¹¹, e uma maior taxa de sucesso pós-cirúrgico foi relatada. Notavelmente, a fixação do cateter de demora ainda é um desafio neste método, e a retração do cateter é comum devido ao movimento do animal, o que torna a administração intratecal do medicamento inconveniente.

Devido às limitações acima, alguns pesquisadores 12,13,14,15 tentaram melhorar as ferramentas de punção, os métodos de cateterismo e os métodos de fixação do cateter, mas os métodos disponíveis ainda precisam ser modificados devido à dificuldade em quantificar o diâmetro dos grânulos utilizados, a necessidade de punções repetidas e o curto comprimento do cateter, ^etc.11

De acordo com a abordagem lombar para^cateterismo intratecal1 e a técnica de Seldinger para cateterismo da veia ^central,16 desenvolvemos um método para cateterismo intratecal em ratos que utiliza um fio de aço inoxidável, uma tampa de vedação de fabricação própria e uma banda antialérgica para simplificar o método existente. Por meio desse método, o cateter pode ser facilmente inserido no espaço subaracnóideo e fixado de forma estável no dorso do rato, evitando-se a necessidade de punções repetidas para administração intratecal repetida de medicamentos.

Aqui, apresentamos um método modificado que pode melhorar a taxa de sucesso do cateterismo intratecal em ratos e representar uma abordagem simples, conveniente e confiável para a administração intratecal repetitiva de medicamentos.

Protocolo

O cateterismo intratecal foi realizado em estrita conformidade com as recomendações das Diretrizes para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório dos Institutos Nacionais de Saúde, e o protocolo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Animais Experimentais, China (No. TJBH15523201). Ratos machos da raça Sprague-Dawley (SD) foram utilizados no experimento. Foram tomados cuidados para minimizar a dor e o desconforto dos animais.

1. Preparação de materiais e instrumentos

NOTA: A preparação de materiais e instrumentos é muito importante para o sucesso do cateterismo intratecal.

1. Preparar um tubo PE10 de 15 cm de comprimento (o comprimento é determinado em função da distância entre a cabeça do rato e a extremidade da cauda), introduzir um fio de aço inoxidável de 20 cm de comprimento (0,2 mm de diâmetro) com duas extremidades polidas no tubo PE10 como suporte e marcar o tubo a 2 cm de uma das extremidades para indicar a profundidade de inserção (conforme marcado por cruzes pretas na figura 1A), B).
2. Corte a ponta afiada de uma agulha de 22 G e sele a extremidade distal (Figura 1C).
3. Corte um cateter peridural (1,0 mm de diâmetro externo) em fragmentos de 1 cm. Em seguida, insira um fragmento em uma agulha 22 G sem ponta afiada (Figura 1D) e sele a extremidade distal do fragmento com um par de pinças retas aquecidas. Este aparelho é chamado de tampa de vedação do tubo (Figura 1E) .
4. Prepare uma faixa antialérgica de 0,3 cm × 0,5 cm cortando uma fita de seda (1,25 cm × 9,1 m) com uma tesoura (Figura 1F).

2. Preparação para a cirurgia

1. Prepare os instrumentos para o cateterismo intratecal, esterilizando-os antes da cirurgia. Os instrumentos utilizados para a cirurgia são pinças dentadas, tesouras, aparelhos de gavagem, cabo de bisturi e lâminas #10. (Figura 2).
2. Mergulhe o tubo PE10 e o fio-guia em etanol a 75% para esterilização por aproximadamente 2 h.

3. Cirurgia

1. Anestesiar o rato com isoflurano a 3% a uma taxa de fluxo de 3 L/min.
2. Coloque o rato na mesa de operação e observe o reflexo de retirada ao beliscar a pata traseira com uma pinça. A ausência de movimento da pata traseira em resposta à estimulação confirmou o sucesso da anestesia. Administrar analgesia adequada por injeção intramuscular de 1 mg/kg de meloxicam antes da cateterização intratecal.
3. Remova os pelos da região da coluna lombar das costas e da área entre as duas orelhas com um barbeador.
4. Coloque um tubo centrífugo (3 cm de diâmetro) sob o abdômen do rato na junção cintura-quadril para aumentar a flexão na coluna lombar, dando mais espaço para a passagem da agulha e do cateter.
5. Esterilize os locais cirúrgicos (a área sobre a região da coluna lombar e a área entre duas orelhas) com solução de iodopovidona e depois com solução de etanol três vezes. Cubra o rato com um curativo asséptico e exponha os locais cirúrgicos. Em seguida, lave o tubo PE10 e o fio-guia com solução salina normal antes da cirurgia.
   NOTA: A cauda não foi coberta para que o movimento da cauda pudesse ser observado durante o cateterismo intratecal.
6. Determine a localização do espaço intervertebral entre L5 e L6, localizando o processo espinhoso de L6 no ponto médio entre as cristas ilíacas bilaterais esquerda e direita. Fixe a pele com o polegar esquerdo e o dedo indicador esquerdo do operador e, em seguida, faça uma incisão na linha média de 3-4 cm de comprimento logo acima do processo espinhoso entre L4 e S1.
7. Separe sem rodeios os tecidos subcutâneos com uma tesoura. Localize o espaço intervertebral entre L5 e L6 novamente e faça uma pequena incisão (0,3 - 0,5 cm) em ambos os lados dos processos dorsais L5 e L6.
8. Clamp e levante o processo dorsal L5 com um par de pinças dentadas para expandir o espaço intervertebral. Em seguida, separe sem rodeios os músculos ao redor do corpo vertebral com uma tesoura até que a parte superior do processo dorsal L6 esteja completamente exposta.
   NOTA: A remoção de qualquer parte do corpo vertebral e dos músculos deve ser evitada, com o objetivo de minimizar os danos aos tecidos circundantes.
9. Quando o processo dorsal L5 é levantado com um par de pinças dentadas e o espaço intervertebral é expandido com outro par de pinças, limpe o espaço intervertebral L5-6 com uma bola de algodão até que a área em "V" invertido esteja completamente exposta.
10. Perfure a coluna com uma agulha de 23 G na área em "V" invertido, logo abaixo do topo do processo dorsal L6.
    NOTA: Observa-se um movimento da cauda e/ou fluido transparente incolor flui do espaço subaracnóideo, indicando uma punção bem-sucedida no espaço subaracnóideo.
11. Insira cuidadosamente o tubo PE10 contendo fio de aço inoxidável no canal espinhal no local da punção, inclinado 30° em direção à cauda. Ajuste o ângulo de inserção até que o tubo PE10 possa ser inserido com sucesso sem resistência (um movimento da cauda foi observado durante este processo).
12. Quando a área marcada do tubo PE10 atinge o músculo posterior, o cateterismo é interrompido.
13. Remova lentamente o fio inoxidável do tubo PE10. Um movimento de cauda pode ser observado.
    NOTA: Um movimento de cauda pode ser observado e, após a remoção do fio, fluido transparente (ou fluido vermelho claro) pode fluir para fora do tubo.
14. Em seguida, conecte o tubo PE10 a uma seringa de 1 mL, através da qual 20 μL de solução salina normal são injetados. Depois que a seringa é removida, a solução salina fluirá continuamente para fora do tubo PE10, indicando que ela foi inserida com sucesso no espaço subaracnóideo.
15. Uma vez que o tubo PE10 esteja desobstruído, suture os músculos de um lado do corpo vertebral com uma sutura 4-0 e faça um nó. Em seguida, amarre a sutura ao redor do tubo PE10 e faça outro nó. Não corte a sutura; suturar os músculos do outro lado; amarre a sutura ao tubo PE10 novamente, faça um terceiro nó e corte a sutura.
    NOTA: Este processo fixa o tubo PE10 com uma sutura em forma de 8 para reduzir a possibilidade de deslocamento e retração do tubo.
16. Faça uma incisão de 0,5 cm de comprimento 1 cm abaixo do ponto médio entre as orelhas. Separe sem rodeios os tecidos subcutâneos com uma tesoura e insira um tubo de gavagem de metal em direção à cauda até que a ponta fique visível na incisão lombar.
17. Insira a extremidade distal do tubo PE10 no tubo de gavagem até que o tubo PE10 saia da outra extremidade do tubo de gavagem; Em seguida, retire suavemente a sonda da sonda gástrica.
18. Quando o tubo PE10 for confirmado como desobstruído novamente, suture os músculos restantes ao redor da incisão lombar com uma sutura 4-0, amarre a sutura ao redor do tubo PE10 e faça outro nó para fixar o tubo PE10 novamente.
19. Suturar a pele, evitando danos ao tubo PE10. Em seguida, suture a pele do pescoço com uma sutura 4-0, amarre a sutura ao redor do tubo PE10 e faça um nó para fixar o tubo PE10.
20. Quando o tubo PE10 for confirmado como desobstruído novamente, sele a extremidade extracorpórea do tubo PE10 com uma tampa de vedação.
21. Seque o tubo PE10 com um pedaço de tecido e, em seguida, amarre a faixa antialérgica ao redor do tubo PE10 várias vezes para evitar a retração do tubo PE10 durante o movimento do rato.

4. Experiência de validação de lidocaína

1. Após a cirurgia, devolva o rato à sua gaiola (um por gaiola) e monitore-o de perto durante a recuperação da anestesia até que o rato recupere a consciência.
2. Depois que o rato estiver totalmente acordado, remova a tampa de vedação e injete 20 μL de lidocaína a 2% no tubo PE10 a uma taxa de 0,02 mL / s por meio de uma seringa de Hamilton, seguida pela injeção de 10 μL de solução salina normal.
3. Sele o tubo PE10 com a tampa de vedação.
4. Coloque o rato em uma mesa e observe com atenção. A presença de paralisia do membro posterior após uma injeção intratecal de lidocaína (do tubo PE10) indica o sucesso do cateterismo (Figura 3). A paralisia dos membros posteriores geralmente dura aproximadamente 30 min¹⁰.
   NOTA: Deixe o rato se recuperar por 5-7 dias antes dos experimentos a seguir.
5. Monitore de perto o rato durante o período de recuperação até a recuperação completa da função do membro.

Resultados

Para injeção intratecal, a ponta extracorpórea do tubo PE10 foi cortada e o tubo PE10 foi selado com uma tampa de vedação entre duas injeções de drogas. Em nosso estudo piloto, a taxa de sucesso do cateterismo intratecal foi de aproximadamente 95% (19 de 20 ratos); O sucesso foi indicado por um movimento da cauda e/ou liberação de fluido transparente incolor durante o procedimento. Aproximadamente 85% dos tubos permaneceram no lugar 7 dias após a cirurgia e aproximadamente 80% permaneceram no lugar 28 dias após a cirurgia. Os ratos se recuperaram logo após a operação, e nenhuma complicação foi observada dentro de 7 dias após a cirurgia. O movimento diário foi normal e não foi observada anormalidade comportamental. Esses resultados indicam que nosso método é superior aos relatados anteriormente em termos de taxa de sucesso e taxa de permanência longa.

A paralisia completa dos membros inferiores após a injeção de lidocaína por cateteres indica o sucesso do cateterismo intratecal¹⁵. A taxa de sucesso do cateterismo intratecal é calculada dividindo-se o número total de ratos pelo número de ratos com cateterismo bem-sucedido. Com nosso método modificado, a taxa de sucesso foi de 95%, maior do que a taxa alcançada com o método relatado por Hou et al. (88%)¹⁵. Isso é mostrado na Figura 4.

O tubo intratecal foi monitorado aos 2, 5 e 7 dias após o cateterismo intratecal e a taxa de cateter de demora bem-sucedido foi calculada como número de ratos com cateter de demora bem-sucedido/número total de ratos × 100%. Aos 2, 5 e 7 dias após o cateterismo intratecal, a taxa de sucesso do cateter de demora foi de 94%, 81% e 65%, respectivamente, no estudo de StØrkson et ^al.11. A taxa de sucesso do cateter de demora aos 2, 5 e 7 dias após o cateterismo intratecal foi de 95%, 90% e 85%, respectivamente, com nossa técnica (Figura 5).

Figura 1. Materiais e instrumentos utilizados para cateterismo intratecal. (A) Um tubo PE10 de 15 cm de comprimento foi preparado, e o tubo foi marcado a 2 cm de uma extremidade para indicar a profundidade de inserção. (B) Um fio de aço inoxidável de 20 cm de comprimento com duas extremidades polidas foi inserido no tubo PE10 como suporte. (C) A ponta afiada da agulha 22G foi cortada com uma tesoura e a extremidade distal foi selada com uma pinça. (D) Um cateter peridural (1,0 mm de diâmetro externo) foi cortado em fragmentos de 1 cm, que foram então inseridos na agulha 22G sem ponta afiada. (E) A extremidade distal do cateter peridural foi selada com um par de pinças retas aquecidas; Este aparelho foi chamado de tampa de vedação do tubo. (F) Uma faixa antialérgica de 0,3 cm × 0,5 cm (fita de seda, 1,25 cm × 9,1 m) foi preparada com uma tesoura. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 2. Preparação de instrumentos para cateterismo intratecal. Os instrumentos (como pinça dentada, tesoura, aparelho de gavagem, cabo de bisturi e lâminas #10) foram esterilizados com etanol por aproximadamente 2 h e depois lavados com soro fisiológico aproximadamente 30 min antes da cirurgia. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 3. Resultados do experimento de validação da lidocaína após cateterismo intratecal. Após injeção intratecal de 20 μL de lidocaína a 2% seguida de injeção de 10 μL de solução salina normal, o rato ficou temporariamente paralisado: a paralisia dos membros inferiores ocorreu em 30 s e desapareceu 30 min depois, indicando cateterismo intratecal bem-sucedido. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 4. Comparação da taxa de cateterismo bem-sucedido entre nosso método modificado e um método relatado anteriormente. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 5. Comparação da taxa de cateter de longa permanência entre nosso método modificado e um método relatado anteriormente. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

	Método modificado	Método prévio	Vantagens do método modificado	Desvantagens do método anterior
Método de orientação para inserção	um fio de aço inoxidável	Cânula guia (20G 0,9× 38 mm)	Aumenta a elasticidade do tubo,	A resistência é difícil de sentir, aumentando a dificuldade de operação
			Melhora a taxa de sucesso do cateterismo intratecal	Danos nos tecidos devido à punção repetida
			Reduz a necessidade de espaço operacional	Uma extremidade do tubo é esticada para 1,5 vezes o comprimento original, tornando o diâmetro de ambas as extremidades diferentes
			Minimiza os danos aos tecidos ao redor da coluna lombar	Suscetibilidade ao vazamento de líquido cefalorraquidiano porque o diâmetro da cânula guia 20G é 2 vezes ou mais que o do tubo PE10 esticado
Comprimento do tubo PE10	15 cm	14 ou 28 cm	Fácil de determinar o comprimento do tubo PE10, independentemente da duração da permanência do cateter	A duração da permanência do cateter é menor para o tubo PE10 mais curto; suscetibilidade a cair do corpo para tubo PE10 longo
Método de fixação	Sutura "8" e 4 vezes	1 ou 2 contas	Evita a movimentação e retração do tubo durante as atividades animais	Diferença no diâmetro do tubo em ambas as extremidades e suscetibilidade ao deslocamento do tubo PE10 durante a fabricação do cordão
Método para vedação de tubos	Boné de fabricação própria	Não	Previne o vazamento de líquido cefalorraquidiano	Exigência de corte repetido do tubo PE10
			Evita o corte repetido do tubo PE10
Método de prevenção de retração	Banda antialérgica	1 ou 2 contas	Evita a retração do tubo durante as atividades com animais	Suscetibilidade à retração

Tabela 1. Vantagens e desvantagens do método modificado e de um método relatado anteriormente.

Discussão

Existem várias dicas críticas para este método modificado para maximizar a taxa de sucesso do cateterismo intratecal. Primeiro, um fio de aço inoxidável de 20 cm de comprimento com duas extremidades polidas deve ser preparado e inserido no tubo PE10 como suporte. Em segundo lugar, o operador deve expor completamente a área em "V" invertido após limpar o espaço intervertebral L5-6 com uma bola de algodão, e o espaço intervertebral deve ser expandido com outra pinça enquanto levanta o processo dorsal L5 com pinça dentada. Terceiro, o tubo PE10 deve ser fixado com uma sutura em forma de 8 quatro vezes. Finalmente, a extremidade extracorpórea do tubo PE10 deve ser amarrada com uma faixa e selada com uma tampa de fabricação própria.

A taxa de sucesso do cateterismo intratecal e o dano aos tecidos ao redor dos corpos vertebrais podem influenciar significativamente a confiabilidade dos resultados experimentais¹⁵. Assim, melhorar ao máximo a taxa de sucesso e reduzir os danos aos tecidos circundantes são cruciais no estabelecimento de modelos animais e experimentos relevantes¹. Neste método modificado, um fio de aço inoxidável é inserido no tubo PE10 para orientação, o que aumenta a elasticidade do tubo e melhora a taxa de sucesso do cateterismo intratecal. Além disso, a quantidade de espaço necessária para a operação é reduzida com este método modificado, e os danos aos tecidos ao redor da coluna lombar são minimizados porque os tecidos circundantes são separados sem rodeios, mas não cortados. Em comparação, no método relatado anteriormente¹¹, uma cânula guia de 20 G é usada para reduzir a resistência durante a punção, e muitas vezes é necessária punção repetida, o que pode ferir os tecidos. Além disso, no método relatado anteriormente, para reduzir o diâmetro do tubo PE10, ele é imerso em água morna (60 °C) e depois esticado em uma extremidade até aproximadamente 150% do comprimento original, o que pode não garantir a consistência do diâmetro do tubo e, portanto, pode causar vazamento de líquido cefalorraquidiano porque o diâmetro da cânula guia 20G é aproximadamente duas vezes maior ou igual ao do tubo PE10 esticado. Além disso, em nosso método, a função lombar é preservada ao máximo, o que evita a influência da cirurgia nos resultados de experimentos subsequentes. Esses resultados são consistentes com os relatados por Xu e^cols.2.

No método¹¹ relatado anteriormente, o comprimento do tubo PE10 é de aproximadamente 14 cm se o tubo for fixado no local ao redor do local da punção, mas o tempo de permanência do cateter geralmente é inferior a 7 dias nessas condições (ou o tubo é removido do corpo pelo rato). O comprimento do tubo PE10 é de aproximadamente 28 cm se o tubo for fixado na parte de trás do pescoço, o que é significativamente maior do que o tubo PE10 usado em nosso método (15 cm). Embora as contas tenham sido formadas seguindo o protocolo relatado por Størkson et ^al.11, alguns tubos foram removidos do corpo, e apenas aproximadamente 65% dos tubos ainda estavam fixados no lugar 7 dias após a cirurgia, o que afetou significativamente os resultados dos experimentos subsequentes. Em nosso método, o tubo PE10 é fixado com uma sutura em forma de 8 4 vezes, e a extremidade extracorpórea do tubo PE10 é amarrada com uma banda para reduzir a possibilidade de deslocamento e retração. Seguindo nosso método, aproximadamente 85% dos tubos permaneceram no lugar 7 dias após a cirurgia e aproximadamente 80% dos tubos permaneceram no lugar 28 dias após a cirurgia.

No método¹¹ relatado anteriormente, a ponta extracorpórea do cateter intratecal deve ser cortada para cada administração de medicamento. No entanto, a administração intratecal repetida de medicamentos pode encurtar o tempo de permanência do cateter, o que torna a administração intratecal de medicamentos inconveniente. Portanto, em nosso método, uma tampa de fabricação própria é usada para selar o tubo PE10, que é esterilizado com etanol uma vez ao dia. Isso não apenas evita o vazamento de líquido cefalorraquidiano, mas também reduz a necessidade de corte repetido do tubo PE10 para administração intratecal de medicamentos, garantindo a administração eficaz dos medicamentos.

As vantagens e desvantagens do método modificado e do método relatado anteriormente estão resumidas na Tabela 1. Primeiro, para o método modificado, o uso de fio de aço inoxidável no tubo PE10 aumenta a elasticidade do tubo e melhora a taxa de sucesso do cateterismo intratecal, a quantidade de espaço necessária para a operação é reduzida e o dano aos tecidos ao redor da coluna lombar é minimizado. No método relatado anteriormente, uma cânula guia 20G é inserida até que a resistência seja sentida, e muitas vezes é necessária uma punção repetida, o que pode resultar em danos aos tecidos. Além disso, o tubo PE10 em uma extremidade é esticado até que seu comprimento atinja aproximadamente 150% do comprimento original, o que pode causar vazamento de líquido cefalorraquidiano porque o diâmetro da cânula guia 20G é 2 vezes maior ou igual ao do tubo PE10 esticado. Em segundo lugar, no método modificado, o comprimento do tubo PE10 é determinado antes da cirurgia, e o tempo de permanência do cateter pode ser superior a uma semana. No método relatado anteriormente, o comprimento do tubo PE10 é de aproximadamente 14 cm se for fixado no local da punção, mas o tempo de permanência do cateter geralmente é inferior a 7 dias porque o tubo é suscetível a ser puxado para fora do corpo pelo rato; o comprimento do tubo PE10 é de aproximadamente 28 cm se for fixado na parte de trás do pescoço, o que é significativamente maior do que o comprimento do tubo usado em nosso método. Terceiro, no método modificado, o tubo PE10 é fixado com uma sutura em forma de 8 4 vezes para evitar o movimento e a retração do tubo; uma tampa de fabricação própria é usada para selar o tubo PE10, o que não apenas evita o vazamento de líquido cefalorraquidiano, mas também evita a necessidade de corte repetido do tubo PE10. No método relatado anteriormente, é difícil obter grânulos com um diâmetro consistente, o deslocamento do tubo PE10 é comum quando os grânulos são formados e o corte repetido do tubo PE10 é frequentemente necessário. Finalmente, no método modificado, a extremidade extracorpórea do tubo PE10 é amarrada com uma faixa, o que impede que o tubo se retraia durante o movimento. No entanto, no método anterior, os grânulos não podem impedir de forma confiável a retração do tubo PE10 porque é difícil obter grânulos com um diâmetro consistente.

No geral, este método modificado para cateterismo intratecal tem as seguintes vantagens. Primeiro, o uso de fio de aço inoxidável no tubo PE10 aumenta a elasticidade do tubo e melhora a taxa de sucesso do cateterismo intratecal, a quantidade de espaço necessária para a operação é reduzida e os danos aos tecidos ao redor da coluna lombar são minimizados, o que preserva a função lombar ao máximo possível e evita a influência da cirurgia nos resultados de experimentos subsequentes. Em segundo lugar, o tubo PE10 é fixado com uma sutura em forma de 8 4 vezes, o que evita o movimento e a retração do tubo durante o movimento. Em terceiro lugar, uma tampa de vedação feita por você mesmo é usada para selar o tubo PE10, o que não apenas evita o vazamento de líquido cefalorraquidiano, mas também evita a necessidade de corte repetido do tubo PE10. O corte repetido do cateter pode encurtá-lo, o que torna a administração de medicamentos inconveniente. Finalmente, a extremidade extracorpórea do tubo PE10 é amarrada com uma faixa antialérgica, que impede que o tubo se retraia durante o movimento.

No entanto, existem várias limitações nesta técnica de cateterismo intratecal modificada. Primeiro, após a cirurgia, os ratos precisam ser alojados separadamente (um por gaiola) para evitar danos à extremidade extracorpórea do tubo PE10. Em segundo lugar, a recuperação por 5-7 dias após a injeção intratecal de lidocaína é necessária antes dos experimentos subsequentes.

Em conclusão, este método modificado para cateterismo intratecal pode servir como uma ferramenta útil para a administração intratecal repetitiva de medicamentos e representar uma maneira simples, conveniente e confiável de encurtar a duração dos experimentos.

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 cc syringe		Jiangxi Hongda Medical Equipment Co., Ltd	1 cc
22 gauge × 1” needles		Jiangxi Hongda Medical Equipment Co., Ltd	22G
23 gauge × 1” needles		Jiangxi Hongda Medical Equipment Co., Ltd	23G
25 μL Hamilton Syringes		Shanghai Bolige Co.,Ltd	0.31mm 25 μL
4-O MERSILK NON-ABSORBABLE SUTURE		ETHICON	SA83G
50 mL corning centrifuge tubes 3 cm diameter	430820	CORNING
Epidural catheter and connector		Henan Tuoren Medical Device Co., Ltd	regular type
Gavage apparatus		Shanghai Bolige Co.,Ltd	8#
PE-10 Mirco Medical Tubing	BB31695-PE/1	Scientific Commodities, Inc
Scalpel handle and #10 blades		Jiangsu Songxin Medical Equipment Co., Ltd	125mm
Scissors		Jiangsu Songxin Medical Equipment Co., Ltd	100mm
Sprague-Dawley (SD) rats		Shanghai BK/KY Biotechnology Co., Ltd	Male
Stainless steel wire 0.2 mm diameter		Dongguan Jiazhi Metal Products Technology Co., Ltd.	0.2mm  ×  1m
Toothed forceps		Jiangsu Songxin Medical Equipment Co., Ltd	18cm
URGO silk tape		URGO	1.25cm × 9.1m