Coleta sequencial de sangue da veia cava inferior seguida da veia porta para avaliar metabólitos microbianos intestinais em camundongos

Resumo

O protocolo demonstra um método para coletar sangue de veias porta e veia cava inferior de camundongos sequencialmente para avaliar a produção e absorção de metabólitos microbianos intestinais.

Resumo

Sabe-se que os produtos microbianos intestinais atuam localmente no intestino e são absorvidos pela circulação, onde seus efeitos podem se estender a vários sistemas de órgãos distantes. Os ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) são uma classe de metabólitos produzidos por micróbios intestinais durante a fermentação de fibras alimentares não digeríveis. Eles agora são reconhecidos como contribuintes importantes para a forma como o microbioma intestinal influencia os sistemas de órgãos extra-intestinais por meio do intestino-pulmão, intestino-cérebro e outros eixos de órgãos intestinais em todo o hospedeiro. Os SCFAs são absorvidos do cólon, através do tecido intestinal, para a veia porta (PV). Eles então passam pelo fígado e são consumidos em vários órgãos, como cérebro, músculo, tecido adiposo e pulmões. Os AGCCs são mais facilmente medidos no material fecal expelido, no entanto, medições mais precisas foram obtidas a partir do conteúdo fecal intracolônico. Aqui, propomos que a amostragem de PV e plasma circulante sistêmico de um único indivíduo pode ser preferível para estudar a absorção, transporte e níveis sistêmicos de SCFAs em camundongos. Apresentamos uma nova técnica para amostragem eficiente de sangue da VP e veia cava inferior (VCI) que permite a coleta de volumes relativamente grandes de sangue das circulações portal e sistêmica. Isso é feito ligando o PV, permitindo assim a dilatação ou ampliação do PV à medida que ele se enche das veias mesentéricas que drenam para ele. Usando esse método, conseguimos melhorar a taxa de coleta bem-sucedida, bem como a quantidade total de sangue coletado (até 0,3 mL de VCI e 0,5 mL de PV).

Introdução

Os ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) são uma classe importante de metabólitos produzidos pela microbiota intestinal. Seus papéis críticos na interação entre o microbioma intestinal e outros órgãos distantes¹ foram apoiados por pesquisas que descrevem como eles modulam a inflamação, sinalizam por meio de receptores dedicados e servem como substratos no metabolismo celular 2,3,4,5. Trabalhos recentes de nosso grupo propuseram que os SCFAs são reguladores inflamatórios in vivo

Protocolo

Todas as etapas deste procedimento de não sobrevivência foram aprovadas pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Universidade da Califórnia em São Francisco. O sexo e a linhagem do camundongo utilizados foram camundongos C57BL/6J machos (pesando 25-35 g e com idade entre 12 e 15 semanas). Fêmeas e/ou outras linhagens de camundongos padrão também podem ser usadas.

1. Anestesia

1. Limpe a metade inferior do abdômen do camundongo com cotonetes de etanol a 70%. Administre anestesia administrando uma injeção intraperitoneal de tribromoetanol (250-400 mg / kg). Cet....

Discussão

Este artigo descreve um método inovador in vivo para coleta quase simultânea de amostras de sangue sequencialmente da VCI e PV no mesmo camundongo experimental. Este método é útil para medir os níveis de produtos gerados pela microbiota intestinal, como SCFAs, que transitam pela circulação portal. O volume máximo médio de sangue que pode ser coletado durante um procedimento terminal em camundongos (pesando 25-30 g) é de aproximadamente 1 mL/camundongo, o que por sua v.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,2,2 Tribromoethanol, 97% (Avertin)	Sigma Aldrich	T48402-25G	Anesthetic agent
Buprenorphine Hydrochloride Injection 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05	Analgesic agent
Dressing Forceps	Miltex	6-100	Dissection
Graefe Forceps	Roboz	RS-5136	Dissection
Hepatin sodium 1000 USP units/mL	Hikma	NDC 0641-0391-12	Blood sample syringes/tubes heparinization
Prolene 7-0	Ethicon	8696G	Portal vein ligature
Scissors	F.S.T	14058-11	Dissection
Student Halsted-Mosquito Hemostats	F.S.T	91308-12	Dissection
Surgical tape	3M Transpore	1527-1	Mouse limbs fixation
U-100 Insulin Syringe 28G1/2	EXEL	26027	Blood sample collection