Colocação periorbital de uma sonda Doppler a laser para monitoramento do fluxo sanguíneo cerebral antes da oclusão da artéria cerebral média em modelos de roedores

Resumo

Um procedimento cirúrgico minimamente invasivo é mostrado aqui, que envolve a colocação da sonda Doppler a laser no crânio sobre a região distal da artéria cerebral média (ACM), um local periorbital adequado para ratos e camundongos, para avaliar o fluxo sanguíneo durante a oclusão transitória da ACM.

Resumo

A oclusão da artéria cerebral média (MCAO) é o método padrão-ouro para modelagem pré-clínica de AVC isquêmico em roedores. No entanto, a oclusão bem-sucedida não é garantida nem mesmo pelas mãos cirúrgicas mais habilidosas. Os erros ocorrem principalmente quando o filamento não é colocado na profundidade correta e incluem casos de ausência de infarto ou perfuração do vaso, o que pode causar a morte. A fluxometria Doppler a laser (LDF) é uma técnica confiável que fornece feedback em tempo real sobre o fluxo sanguíneo cerebral regional (CBF) durante o procedimento MCAO. Aqui demonstramos uma técnica rápida para colocação periorbital de uma sonda Doppler a laser para medição de CBF em camundongos e ratos. Nossa justificativa era simplificar a implementação do LDF, incentivando o uso generalizado para melhorar a confiabilidade cirúrgica. A técnica elimina a necessidade de afinamento do crânio e equipamentos especializados, com colocação na região periorbital em vez de colocação dorsal, promovendo eficiência e facilidade de adoção. O protocolo descrito aqui engloba preparações pré-cirúrgicas, colocação de sonda Doppler periorbital e cuidados pós-operatórios. Os resultados representativos incluem representações visuais de elementos processuais, juntamente com traçados representativos de LDF ilustrando cirurgias MCAO bem-sucedidas, com casos de colocação malsucedida de filamentos levando a complicações. O protocolo ilustra o LDF na confirmação da colocação adequada do filamento e oferece um procedimento simplificado em comparação com métodos alternativos.

Introdução

O método de oclusão da artéria cerebral média (MCAO) tem sido amplamente utilizado em roedores desde que foi introduzido na comunidade científica para aplicação em ratos em 1986¹ com a adaptação de Longa descrita em 1990² e adaptações para camundongos logo após³. Embora não descrito na publicação de Longa, o uso do sinal de fluxometria com Doppler a laser (LDF) para confirmar a colocação do filamento foi logo descrito na literatura⁴. O emprego de LDF durante o procedimento MCAO é destaque na literatura, mas é designado como uma etapa opcion....

Protocolo

Camundongos e ratos adultos foram usados para ilustrar este protocolo (25 g, C57BL / 6J, Jackson Laboratories; 250 g, Sprague Dawley, Envigo). O manejo dos animais e os procedimentos experimentais foram realizados com aprovação e em conformidade com o Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade do Arizona, leis nacionais e de acordo com os princípios de cuidados com animais de laboratório¹¹. Ratos e camundongos foram alojados em um horário claro/escuro de 12 h (7h-19h) com comida e água disponíveis ad libitum.

1. Preparação pré-cirúrgica<....

Discussão

O MCAO é o procedimento padrão-ouro para modelar a oclusão e reperfusão da artéria cerebral em roedores e tem sido a pedra angular da pesquisa pré-clínica de AVC, permitindo a indução de isquemia focal em roedores para mimetizar a fisiopatologia do AVC humano. É um procedimento cirúrgico exigente com significativa variabilidade inter e até intra-cirurgião. Embora não haja evidências de que a aplicação do LDF reduza a variabilidade, ela pode melhorar o rigor científico e.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
curved spring scissors	Castroviejo	1501710
forceps #5	Fine science tools	11250-20
forceps #5/45	Fine science tools	1151-35
Forcepts Cautery tool	Conmed	M18019-01
Laboratory tape	Fisherbrand Labeling Tape	15-950
Laser Doppler Monitor	Moore Instruments	MOORVMS-LDF
LDF software	Perisoft for Windows or moorSOFT	NA
Mouse clippers	Philips Norelco	MG7910
Periflux System 4000, probe 407	Perimed	equipment no longer available
plastic wrap	Glad	press n seal
Rat clippers	oster	A5 or similar
Small rodent anesthesia	JD Medical	custom order
small scissors	excelta	362 Sissors or similar
Temperature monitor system with probe	Physitemp	TCAT-2AC Controller