JoVE Journal

Biochemistry

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Cell Transfection and 5-Bromo-2'-Deoxyuridine (BrdU) Incorporation in HeLa Cells

Transcrição

Para iniciar a transfecção celular, adicione 20 microlitros da suspensão de células HeLa aos poços de placa de 384 poços contendo siRNA diluído para semear 700 células HeLa por poço. Após uma hora de incubação à temperatura ambiente, coloque a placa do poço em uma incubadora por 72 horas a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. Para incorporar BrdU nas células transfectadas, adicione 10 microlitros de solução de BrdU 90-micromolar a cada poço após 56 horas de transfecção de siRNA.

Incubar as células durante 16 horas a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. A especificidade da incorporação de BrdU no DNA mitocondrial de células HeLa foi estudada usando células rho0 sem DNA mitocondrial.

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