Dorsal Root Ganglion (DRG) Sample Preparation for Cryosectioning

Iniciar pela pós-fixação do tecido DRG dissecado da medula espinhal do camundongo anestesiado em formaldeído a 4% por três horas à temperatura ambiente. Em seguida, incubar o tecido em 30% de sacarose em PBS a quatro graus Celsius durante a noite. Em seguida, prepare a OCT base adicionando o composto OCT e cobrindo a superfície superior do bloco de alumínio.

Congele o bloco de alumínio coberto a menos 20 graus Celsius por cinco a 10 minutos. Corte a parte superior do OCT a 30 micrômetros de espessura usando o criostato, até que sua superfície seja tão plana quanto o OCT de base.

Para realizar o embutimento de DRGs em OCT, seque o tecido DRG colocando-o em uma placa de Petri seca e movendo-o de um local para outro duas ou três vezes com a pinça seca. Em seguida, coloque o DRG seco na base do OCT na posição 12:00, usando uma pinça seca. Certifique-se de manter pelo menos cinco milímetros de distância entre a borda superior do DRG e a borda superior do OCT de base, com a parte dorsal na posição 12:00 e a parte ventral na posição 6:00.

Em seguida, adicione a OCT em uma forma redonda ou oval para incorporar todo o tecido DRG com o DRG no centro. Congele a amostra de OCT e DRG da tampa a menos 20 graus Celsius por cinco minutos. Uma vez feito, corte a parte superior da OCT da tampa em uma espessura de 30 micrômetros até que o DRG esteja visível.