Para este estudo, utilizar-se cigarrinhas marrons pequenas ou SBPHs criadas em mudas de arroz. Assim que as culturas estiverem prontas, coloque os SBPHs crescidos em um tubo de centrífuga e coloque-os em um banho de gelo por 10 a 30 minutos. Em seguida, coloque um SBPH congelado em uma lâmina de vidro sob um microscópio estéreo com o abdômen voltado para cima e ajuste o foco em suas seis pernas.
Prepare duas pinças de alta precisão com pontas ultrafinas. Usando um tweezer, pressione o corpo do inseto para mantê-lo no lugar e puxe cuidadosamente uma perna com a outra tweezer. Em seguida, pressione suavemente o peito do inseto, permitindo que a hemolinfa flua através da ferida.
Para coletar hemolinfa, prepare uma micropipeta colocando um tubo capilar de microlitro no bulbo da pipeta. Coloque o tubo capilar próximo à ferida do inseto, segurando o bulbo da pipeta da micropipeta. Tocar a ponta capilar na hemolinfa exsudada e coletá-la.
Quando o tubo capilar atingir a linha de escala desejada, bloqueie levemente o pequeno orifício no bulbo da pipeta com o dedo para interromper o processo de absorção. Em seguida, despeje a hemolinfa coletada em 100 microlitros de tampão PBS. A acurácia da coleta de hemolinfa foi confirmada pelo SDS-PAGE, que mostrou conteúdo proteico semelhante nas três amostras de hemolinfa, coletadas separadamente.
Para as larvas, a concentração de proteína total foi de aproximadamente 3,7 miligramas por mililitro. Em SBPHs adultos femininos e masculinos, as concentrações de proteína foram de cerca de 3,5 e 3,6 miligramas por mililitro, respectivamente, não mostrando diferença significativa entre as três amostras. A hemolinfa larval apresentou hemócitos de dois a 20 nanômetros de tamanho.
Além disso, a concentração celular foi comparável nas três amostras de hemolinfa coletadas.
