Para começar, adicione 4,5 mililitros de solução de trabalho EDC recém-preparados a um tubo de polipropileno de 15 mililitros contendo as esferas de poliestireno funcionalizadas com amina e TCPP em tampão MES. Coloque o tubo em um rotador inversor a 35 RPM por 16 horas à temperatura ambiente protegida da luz. Em seguida, centrifugar por 10 minutos.
Aspirar o sobrenadante e ressuspender as contas em 0,8 mililitros de Solução Salgada Balanceada de Hank. Em seguida, usando uma pipeta de um mililitro, transfira a solução de esferas para um frasco de polipropileno âmbar e armazene-a a quatro graus Celsius. A relação entre a formação de partículas, a mediana, a intensidade da fluorescência ou MFI e a razão TCPP/EDC do cordão mostrou que, com o aumento das razões, o MFI aumentou até formar um platô.
As partículas apareceram apenas quando o EDC foi usado como reagente de acoplamento durante o procedimento de rotulagem. A marcação das esferas apenas com TCPP resultou em intensidade de fluorescência muito menor. Quando as esferas marcadas com TCPP foram testadas após 300 dias, nenhuma mudança significativa no MFI ou no conteúdo de partículas foi observada.
O acoplamento do TCPP às esferas teve um efeito mínimo sobre seu espectro de emissão de fluorescência. No entanto, seu espectro diferia mais das células de câncer de pulmão A549 marcadas com TCPP. Em uma amostra de escarro multiflora quatro marcada, as esferas marcadas com TCPP funcionaram tão bem quanto as células A549 coradas com TCPP.
