Para começar, parasitar cerca de 40 pupas de Lucilia sericata em vespas Nasonia adultas adultas emergentes acasaladas por 1,5 dias. Dentro de 12 a 24 horas após a parasitização, abra cuidadosamente uma extremidade da concha pupal usando uma agulha dissecante estéril. Segure a outra extremidade da casca e localize o embrião da vespa.
Em seguida, transfira o embrião para um filtro de células estéril umedecido com PBS. Uma vez transferidos de 20 a 30 embriões, lave-os com 1.000 microlitros de solução de hipoclorito de sódio a 10%, seguido de PBS estéril e etanol a 70%. Por fim, lave-os três vezes com PBS estéril.
Em seguida, coloque uma folha de malha de polipropileno pré-molhada com PBS em uma placa de 24 poços. Usando uma pequena escova esterilizada, transfira suavemente os embriões de vespa do filtro de células para a folha de malha de polipropileno. Para a criação da vespa, adicione 50 microlitros de NRM preparado a cada poço com uma folha.
Em seguida, adicione um mililitro de água estéril entre cada poço para manter um ambiente úmido para o crescimento. No dia seguinte, transfira a malha de polipropileno contendo a larva de um poço para outro poço usando pinças desinfetadas com álcool e adicione 50 microlitros de NRM equilibrado. Após nove a 11 dias de alimentação, mais de 80% das larvas devem evoluir para pupas brancas ou amarelas.
em seguida, transfira a malha para uma placa de poço limpo. No presente estudo, a taxa de sobrevivência das vespas livres de germes de larva para pupa foi significativamente melhorada em comparação com a criação de vespas livres de germes com NRM versão três. Além disso, não houve diferença no período de geração entre as vespas livres de germes e criadas convencionalmente.
