Comece tomando 500 a 1000 nanogramas da escassa biblioteca de DNA celular. Secar o DNA com um concentrador a vácuo e ressuspendê-lo em 3,4 microlitros de água livre de nucleases. Após a adição dos bloqueadores, e enquanto estiver no termociclador, a 65 graus Celsius, transfira a solução de hibridização com o RNA biotinilado para a biblioteca bloqueada.
Depois de fechar a tampa do tubo firmemente, incubar no termociclador durante a noite a 65 graus Celsius. Em seguida, transfira 50 microlitros de contas de estreptavidina T1 por amostra para um tubo de baixa ligação de DNA de 1,5 mililitro e coloque-os em um ímã de tubo de 1,5 mililitro. Uma vez que todas as contas estão presas à parede, remova o sobrenadante deixando as contas para trás.
Agora lave as contas três vezes com 200 microlitros do tampão de ligação do kit de enriquecimento alvo e ressuspenda as contas em 200 microlitros de tampão de ligação. Transfira a amostra para as esferas ressuspensas enquanto estiver no termociclador e incube por 30 minutos. Após lavar as contas com 200 microlitros de tampão de lavagem 1, incubá-las por 15 minutos, girando à temperatura ambiente.
Em seguida, lave as contas três vezes com 200 microlitros de tampão de lavagem 2 aquecido a 65 graus Celsius e incube em um bloco térmico. Finalmente, após amplificar a biblioteca por PCR, realizar uma purificação de DNA usando esferas paramagnéticas, adicionando 270 microlitros de contas de estoque à amostra e misturando por vórtice. Um perfil de eletroforese automatizado de uma biblioteca, pouco antes da captura, forneceu 49,7 nanogramas por microlitro de DNA em 20 microlitros de volume de reação.
No entanto, 3,06 nanogramas por microlitro de DNA são obtidos a partir de um perfil de eletroforese automatizada de alta sensibilidade a partir de uma biblioteca leáquica acabada.
