Para começar, pegue uma lâmina com tecido fresco polimerizado arquivado ou tecido cerebral de camundongo fixado com paraformaldeído. Usando proteção ocular, use uma lâmina de barbear para separar as duas lâminas de vidro da câmara gelificante. Corte o gel em branco ao redor do tecido para minimizar o volume e certifique-se de cortar assimetricamente para rastrear a orientação do gel após a homogeneização.
Levante suavemente o tecido que contém gel da lâmina com uma lâmina de barbear. Transfira para um tubo centrífugo de dois mililitros. Encha o tubo até ao topo com tampão de homogeneização pré-aquecido a 80 graus Celsius.
Em seguida, incubar a amostra com agitação a 80 graus Celsius por oito a 60 horas. Despeje o conteúdo do tubo de centrífuga em um único poço de uma placa de cultura de células plásticas de seis poços e remova o tampão de desnaturação com uma pipeta de transferência. Para remover completamente o SDS restante do hidrogel, lave a amostra em uma solução de tensoativo não iônico a 1%.
Finalmente, armazenar a amostra em PBS e azida de sódio a 0,02% a quatro graus Celsius.
